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저는 plasmid에서 시퀀싱해야 되는 영역을 포함해서 PCR하고 그 PCR product를 시퀀싱 맡겼습니다.
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개구리알
(비회원)
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14.08.25 08:46
물론 회사의 QA가 잘못 이루어지고 있을수도 있지요.
하지만 제 경험상 대부분의 경우는 DNA puritiy 문제였습니다
특히 RNAse가 제대로 일을 못한 경우 지저분하게 읽히더군요.
mini prep을 다시 해보시고 RNase 만 주변것을 얻든지 새로 사든지 해서 넣어보세요
lysis buffer에 함께 넣어도 되고 elution 후에 넣어도 됩니다
같은 template에서 같은 restriction enzyme linker를 달아 PCR로 insert를 증폭시켜서 다른 vector에 삽입하였는데, 시퀀싱 결과가 너무 제각기 입니다. 위 선생님 두 분께서 추천해 주신 대로 일단 PCR 증폭 또는 RNase 처리를 통해서 purification 하여 다시 진행해 볼까 합니다. 또한 plasmid의 구조가 문제가 될 수 있다는 회사의 코멘트도 있어 mini-prep을 다시 하여 시퀀싱을 시행하려고 합니다.
순차적으로 진행해 보고 제 결과 공유하도록 하겠습니다. 고맙습니다.
회사를 바꾸니 간단히 해결되었던 경험이 있습니다.