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 전체 > Plant Biology > Plant Tissue Culture
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질문 식물 protoplast
궁금해요  |  2014.07.19 10:50
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
안녕하세요
식물을 이용해서 protoplast를 하려고하는데요
주위에서 식물 전공한 사람이 없어서 질문올립니다.
논문찾아보고 그대로 실험을 해보고 있는데
아무래도 실험적인 스킬이라던지 제대로 하고 있는게 맞는지 궁금해서요~

실험할때 사용되는 시약은 논문마다 약간씩 차이가 있지만
제가 참고하고 있는 논문의 실험내용은,,
식물 어린잎을 채취해서 잘게 자른 후 0.3M sorbitol에 넣어 25도, 60rpm, 2시간동안 처리하고,
효소용액(1% cellulase, 0.25% macerozyme, 5mM CaCl2, 1% MES, 0.5M sorbitol, pH 5.6)을 넣어
25도, 60rpm, 16시간정도 처리를 한후 60um nylon mesh로 거른 후 1000rpm에서 10분간 원심분리합니다.
pellet을 13% sorbitol에 현탁시킨후 21% sucrose를 넣어 700rpm으로 5분간 원심분리하여 상등액을 사용한다고 되어있습니다.

여기서 궁금한것은 pellet을 13% sorbitol에 현탁시킨후 21% sucrose를 넣어 700rpm으로 5분간 원심분리하여 상등액을 사용한다고 되어있습니다. 이부분입니다.
다른논문에서도 사용하는 용액의 차이가 있지만 원심분리를 저속으로하면 원형질체가 상등액에 뜬다고 되어있는데.. 몇번 시도해봤지만 상등액에는 아무것도없고... 모아진 pellet에 원형질체와 찌꺼기가 함께있어요. 또 13% sorbitol에다가 왜 21% sucrose를 왜 넣어요? 원형질체가 20%sucrose용액정도에서 용액위로 뜬다고는 하는데 저렇게 넣으면 두 용액이 섞일텐데.. 안섞이나요???
대체 원형질체만 어떻게 분리해내는 건지..  제발좀가르쳐주세요ㅠㅠㅠㅠㅠ
제발~~~~부탁드립니다.

아 한가지더... 식물세포 배양할때 식물호르몬을 안 넣어주면 배양이 전혀 안되나요?
#식물세포
 
#protoplast
 
#식물 protoplast
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
flicarus  |  2014.07.20    
Sucrose solution에 처음 넣어줄 때 sucrose와 섞이지 않게,
sucrose의 표면 위에 살살 얹어주는 느낌으로 protoplast를 넣어주어야 합니다.

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