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질문 supernatant를 이용한 western blot
알9회말2아웃  | 2014.06.22 22:20
안녕하세요 Inflammasome을 연구하려는 대학원생입니다.

Cell lysate를 이용해서 caspase-1이나 IL-1 beta의 pro-form이나 mature form을 detection하긴 했는데...

supernatant에서도 확인을 해봐야할 상황이라서요... ㅠㅠ

methanol/chloroform precipitation 시에 따로 protein 건조장치를 사용하는 것 같은데...

그런 장비는 없어서 air dry를 해야할 상황입니다.

그래서 많은 연구자 님들께 여쭈어 보도록 하겠습니다.

1. supernatant를 이용하여 western blot 시행 시에 어떤 크기의 well에 serum free media를
    어느 정도의 volume으로 넣고 supernatant를 harvest하시는지 궁금합니다.

2. 이렇게 얻은 supernatant를 특별한 protein 건조장치를 이용하지 않는 방법의 precipitation
   protocol을 가지고 계시면 알려주실 수 있는지 궁금합니다.

많은 분들의 의견 수렴하오니... ㅜㅜ

부디 답변 부탁드립니다.~

끝까지 읽어주셔서 감사드려요~
#supernatant
 
#western blot
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리하늘을달려라  |  2014.06.23   

예전에 TCA precipitation 방법을 이용해서 secreted protein을 WB하여

publish한적은 있습니다만...

요즘같으면 리뷰어가 ELISA를 요구할것 같은데요...


어쨋든 특별한 건조장치 없이 실험했었습니다.

protocol은 구글링하시면....

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