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박사과정
(비회원)
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14.06.06 13:34
IDA resine이 His-tag affinity chromatography에 사용하는 거 아닌가요?
그리고 ICV는 column의 internal volume을 말씀하시는 거구요?
제가 이해한 것이 맞다면...
Internal volume을 계산하시고자한다면 blue dextran같이 고분자량 물질이 필요하구요...
이걸 Buffer와 함께 column에 흘려보낸 후 blue dextran이 나온 지점을 void volume으로 잡고 packing 된 column의 total volume (4.3 x 파이r2)에서 빼시면 될 거예요..
(Vinternal = Vtotal - Vvoid)
헌데.. 이런 건 보통 size exclusion chromatography에서 필요한 거고요...
Ion exchange에서도 많이 중요하지는 않고...
Affinity chromatography 라면 그냥 계산 없이.. Manual run 하시면 될 것 같은데요?
예를 들면 packing된 colum이 total volume이 13 ml (높이가4.3cm 고 지름이 1cm)라면요 column 연결하고 130 ml정도 binding buffer로 씻고 sample 넣은 후 다시 130 ml binding buffer로 씻고 65 ml 정도 elution buffer (ex, 300~500 mM imidazole)로 target 100 % 주고 linear gradient 걸어서 elution하면 될 텐데..
Resine에 나와 있는 maximum pressure확인 하셔서 flow rate만 조절하시면 되구요..
질문자님이 어디까지 아시는지 몰라서..
괜한 참견일지도 모르겠네요.. ^ ^;