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질문 단백질 정제시,컬럼레진 문의드려요
정제입문자  | 2014.06.05 14:58
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
단백질 정제를 하려고 컬럼을 구입하였습니다.
이제, 이 컬럼에 IDA resine을 충진을 시켰는데요.
이 충진된 레진을 LC로 사용하려고 하는데.
프로그램을 어떻게 짜야할지 고민이 되서 고수님들께 여쭈어봅니다.
인터넷에 찾아보니, 선속도라는것을 가지고 계산을 한다고 하는데.
어떻게 해야될지 하나도 모르겠네요.
레진 충진은 컬럼에 4.3 cm 정도 충진되어있는 상태입니다.
어떤 식으로 선속도를 가지고 계산을하여 ICV 값을 얻게되는지 고수님들의
친절한 답변 기다리겠습니다.
감사합니다.
#정제
 
#LC
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
박사과정  |  2014.06.06    

IDA resineHis-tag affinity chromatography에 사용하는 거 아닌가요?

그리고 ICVcolumninternal volume을 말씀하시는 거구요?

제가 이해한 것이 맞다면...

Internal volume을 계산하시고자한다면 blue dextran같이 고분자량 물질이 필요하구요...

이걸 Buffer와 함께 column에  흘려보낸 후 blue dextran이 나온 지점을 void volume으로 잡고 packing columntotal volume (4.3 x 파이r2)에서 빼시면 될 거예요..

(Vinternal = Vtotal - Vvoid)

헌데.. 이런 건 보통 size exclusion chromatography에서 필요한 거고요...

Ion exchange에서도 많이 중요하지는 않고...

Affinity chromatography 라면 그냥 계산 없이.. Manual run 하시면 될 것 같은데요?

예를 들면 packingcolumtotal volume13 ml (높이가4.3cm 고 지름이 1cm)라면요 column 연결하고 130 ml정도 binding buffer로 씻고 sample 넣은 후 다시 130 ml binding buffer로 씻고 65 ml 정도 elution buffer (ex, 300~500 mM imidazole)target 100 % 주고 linear gradient 걸어서 elution하면 될 텐데..

Resine에 나와 있는 maximum pressure확인 하셔서 flow rate만 조절하시면 되구요..


질문자님이 어디까지 아시는지 몰라서
..

괜한 참견일지도 모르겠네요.. ^ ^;


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