실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Pull-down Assays
Native PAGE을 통한 protein interaction 확인이 가능한가요
대학원생 (비회원)
현재 단백질들 간의 상호작용을 보기위하여 해당 단백질들의 정제과정에 있습니다.
궁금한 것은 정제 이후 실제 상호작용 한다는것을 실험적으로 증명하는 단계입니다.
이론적으로만 알고있지만 가능한 방법으로는
1 . A, B 단백질을 각각 GST, His tag을 통해서 정제 한 후 이를 pull down assay 하는 방법
2. A, B 단백질을 His tag으로 정제하여 in vitro 에서 binding 한 후 Native PAGE 를 통해서
A, B A+B 3가지를 비교하여 binding을 확인하는 방법,
기타 다른 방법들이 있지만.. 여건상 힘들것 같아서 위 두가지 실험에 대해서 생각하고있습니다.
실제로 nativa page를 통해서 interaction한다는 것을 증명하여 논문에서도 자주 쓰는지요?
아니면 일반적으로 pull down assay를 많이 하는 지요..
또한 in vitro 조건에서 단백질끼리 binding 해보신 분이 있다면 과정이나 변수정도는 어렵지 않은건가요..?
실험실에 물어볼수 있는 사람은 없고 시간도 없어서.. 답답한 마음에 질문드립니다.
도와주세요!
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