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리트머스
(비회원)
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06.06.07 13:25
1. Trizol을 직접 dish에 넣어 cell을 녹입니다.
2. 이후 Micro Tube로 옮긴 후 Chloroform 200ul (per 1ml of Trizol)을 넣고 약 15초
간 세게 inverting합니다.
3. 5분간 랙에 꽂아 놓은 후 centrifuge at 12000rmp for 5min
4. 상등액만 따서 새 튜브로 옮겨 담고 동량의 isopropanol을 넣고 잘 섞일 정도로만
몇번 inverting합니다.
5. centrifuge at 12000rmp for 10min
6. RNA pellet이 딸려오지 않게 isopropanol을 제거합니다.
7. 75% EtOH 1ml로 washing합니다.
8. centrifuge at 12000rmp for 10min
9. EtOH를 제거한 후 pellet를 말립니다.
10. DEPC water를 적당량 넣고 RNA pellet를 녹입니다.
이렇게 하면 되요..^^*
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레벨5
vetman..
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06.06.08 00:39
어느 회사것을 써는지 모르겠지만,
회사 홈페이지 가면 프로토콜 잘 나와있습니다.
참고로 전 invitrogen 것을 쓰는데, 거기 홈페이지 가면 트라이졸을 이용한 DNA, RNA, Protein분리에 대해 잘 나와있습니다.
한가지 제 경험에 의한 팁은 센트리퓨지할 때 너무 세게 하면 좋지 않습니다.
8000-10000Xg 정도가 적당한 거 같습니다.
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레벨5
vetman..
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06.06.08 01:21
아래 링크를 달아드릴게요.
<a href=http://www.invitrogen.com/content/sfs/manuals/15596026.pdf target=_blank>http://www.invitrogen.com/content/sfs/manuals/15596026.pdf</a>
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병리초보
(비회원)
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06.06.13 01:21
스크레퍼로 긁을 수 없는 아주 작은 디쉬가 아니면 그냥 스크레퍼로 하세요.
트립신 아깝고, 귀찮습니다.ㅋ
프로토콜은 다른 답글대로 하시면 될듯^^