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 전체 > Immunology > Immunoprecipitation
조회 4765  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Immunoprecipitation할 때
IP초보~  | 2007.08.27 11:28
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
- Immunoprecipitation할 때 왜 ~55kD에서 IgG heavy chain band 가 보이게 되는건가요?

- 그리고 저희는 negative control로 normal mouse IgG를 사용하는데 왜 그러는지 궁금합니다.

너무 당연한 질문인거 같은데 이해를 못해서~~--;
IP고수님들께 도움을 청합니다.~~^^
#Immunoprecipitation
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리엘피스  |  2007.08.27   
IP는 tube내에서 target을 먼저 일차 antibody로 잡고 target과 antibody의 complex를 protein A bead로 잡아내는 방식입니다. 따라서 IP후 target/antibody/protein A bead 를 끓여주면 target은 물론 antibody까지 떨어져 나와 SDS-PAGE에서 running되는데 이 antibody가 western blot에서 검출되는 것입니다. IP에 사용한 antibody와 western에서 사용하는 antibody의 species source를 달리하면 western에서 antibody band가 나오지 않게 할 수 있습니다.

IP를 포함한 모든 면역반응실험에서 가장 좋은 control은 antibody를 만들기 전에 미리 채취해놓은 preimmune serum을 사용하는 것이지만 차선책으로 면역반응을 시키지 않은 다른 개체의 serum을 control로 사용하는 것입니다. 그 이유는 이 serum에는 target을 잡는 antibody가 없기 때문에 signal이 뜨면 않되고 설령 signal이 보였다면 이는 non-specific이기 때문입니다.
꽃개구리아이피  |  2007.08.28   
1. 엔티바디 구조가 헤비와 라이트체인이 S-S bond로 서로 결합되어 있죠?
그런데 단백질을 끊이는 STS에 beta-mercaptoethanol이나 DTT가 들어가게되면
이 결합이 끊어져서 헤비와 라이트체인이 분리되어 버립니다.
따로 놀게 되서 그렇게 나타납니다.

2. normal IgG로 하면 전혀 IP가 되지 않고 순전히 antibody만 나옵니다.
헤비와 라이트 두개의 밴드만..
즉 이것이 원래 아무것도 바인드하지 않는 엔티바디이기때문에
negative control로 쓰는 겁니다.
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