실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Southern Blot
ELISA 에 관해 질문입니다 ㅜㅜ
레벨1 막막한 석사 ㅜ
안녕하세요. 여러 박사님들 ㅜㅜ
이제 3학기가 되는 석사생입니다... 연구실 사정상 여러가지 실험을 하다가, 전부다 실패하고 ㅜ
이제야 졸업 테마로 DNA를 96Well 에 부착해서 형광 시그널을 측정하는 ELISA 실험으로 교수님께서 졸업하라고 하시는데요 ㅜㅜ
지금 제가 4개월째 이 실험을 하는데 어디가 잘못되있는건지 간략하게 질문좀 드리겠습니다 ㅜㅜ
1) 저는 Corning에서 나온 DNA-binding surface 라는 (Carboxyl 기가 NHS에 활성화 되어 있는 기판, 투명합니다) 기판에 NH2-DNA (1uM x 100 ul) 를 부착후, wahsing buffer 로 워싱후,
2) 3% BSA 200ul 로 블로킹 후, biotin-cDNA (1uM x 100 ul) 를 넣어줍니다.
3) 그리고, 다시 세척후에, Streptavidin-Cy3 ((0.05mg/ml X 100 ul, Emission peak:570 nm) 나 Streptavidin-QD (10nM X 100 ul, Emission peak:625 nm) 를 붙여서,
4) 형광을 측정하는 실험을 하는데요..
이게 형광 측정후 백그라운드 시그널 값이 200~300 정도면,
NH-DNA-Biotin : STV Cy3 형광 시그널 값: 2000
NH-DNA : STV Cy 3 : 1500
정도로 차이가 거의 안나네요 ㅜㅜ
아는 박사님은 니가 실험을 잘못한거라고 밖에 안하시고 원래 4-5000 정도는 차이가 나야한다고 하시는데,
전 이스텝만 죽어라 해도 모르겠네요 ㅜㅜ
이게 dna가 잘 안붙어서 그런건가요 ㅜ 아니면 뭐 다른 문제가 있어서 그런건가요 ㅜㅜ
조건이 안잡혀서 죽을거같네요 ㅜㅜ 고수님들 도와주세요 ㅜ
아 힘들어도 박사까지 할려그랬는데, 좌절만 쌓이네요 ㅜㅜ
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