실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
PCR 관련..
초보아가씨 (비회원)
원래 genome사이즈는 5.784kb인데 vector에넣었더니 원래 사이즈보다 작은 genome이생겼습니다. 그래서 원래 사이즈의 genome을 얻기위해 primer를 이용해 앞뒤로 genome을 합성하는 PCR을 하고 있습니다. 전체 DNA sequence는 알고 있고 저는 현재 가지고 있는 genome사이즈의 반(약2.5kb)을 잘라 앞부분을 늘리는 PCR하고 있습니다. PCR은 총 4번하고 지금까지 두번은 PCR로 DNA합성이 되었는데 세번째 PCR이 되지않습니다. 세번째 PCR을하면 DNA사이즈가 0.5kb에서 band가 나타납니다.denaturation은 보통94도애서5분으로했고 annealing temperature는 60도나 58도에서 45초하였고 polymerization은 72도에서 2~3분 하였습니다. 사이클수는 30~35정도로 했구요. gradient PCR도(55-64도) 해봤지만 결과는 마찬가지였습니다. 두번 primer를 다시 제작해봤지만 소용없었습니다. polymerase는 pfu를 사용했습니다.
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