실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
RT-PCR을 할때요...saturation??
레벨5 RT-PCR
더운데 수고가 많으십니다;; 세포에서 trisol을 이용하여 RNA를 뽑아서 RT후 PCR을 하고있습니다.. 저같은경우는 세포에서 뽑은 RNA를 정량하여 5ug을 2ul의 10pmol짜리 oligo dT랑 섞어서 바이오니아 RT premix를 이용하여 cDNA로 만든후에 이 결과물2ul를 10pmol짜리 프라이머 1ul씩 섞어서 바이오니아 premix섞어서 35cycle정도 돌림니다.. 근데 문제는,,,,궁금한점은,., 분명히 변화과 보일꺼라 믿은 포인트에서 control과 똑같이 변화가 않보입니다 제가 RT룰 할때 남들보다 많은양을... (남들은 1ug한다더라구요) 또, RT후 2ul를 PCR하면,,,혹시 프라이머나 premix솎의 dNTP가 충분치 않아서 밴드에 변화가 보이지 않을 수도 있는거 아닌가여?? 특히 쫌 평상시에도 양이 많은 RNA같은 경우는 그럴수 있지 않을까요??;;; 그냥 궁금해서 질문드려요;;;
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