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Lab 마다 다를 수있지만 저희 Lab에서는 trypsin을 5min 처리후 cell을 떨어트립니다.
그리고 centrifuge는 돌리지 않고요.
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레벨5
ExDown's
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14.03.12 17:12
플라스크를 쳐주거나 파이펫팅 해주어도 됩니다.
다른문제가 아니라면 centrifuge rpm을 낮춰보세요
1000rpm도 충분합니다.
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레벨5
seraphina
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14.03.19 18:41
trypsin이 강해서 그런걸수도 있습니다.
저같은경우에는 세포가 잘 안떨어지면서 잘 터지는 아이들이라서 트립신 대신
accutase을 사용합니다.
또, 파이펫팅은 최소한으로 해줍니다.
아큐테이즈 처리하고 37도에서 3분,
cell culrturedish바닥을 다섯손가락 끝으로 20번정도 톡톡 쳐주면 왠만한 세포들은 다 떨어집니다.
dish를 기울여서 medium으로 1:1의 volume으로 중화시켜준후(아큐테이즈 3ml처리했으면 미디엄 3ml을 위에서 아래로 흐르게끔 넣기)
파이펫팅하지 않고 바로 tube에 모읍니다.
그후, 넣어준 미디엄 양만큼 더 미디엄을 넣어 (최종 아큐테이즈 : 미디엄 = 1:2) 파이펫팅을 통해 깔끔히 헹궈 튜브에 넣어줍니다.
이렇게 하면 damage를 최소화 하며 잘 떨어지는 편이지만
만약 현미경으로 확인해보고 덜떨어진 세포가 많이 있다면 dish를 PBS워싱하고 위과정을 한번더 해줍니다.