실험Q&A를 통해 여러분의 지식을 나누어 주세요. 답변을 등록하시려면 로그인 해주세요.
본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
293t에 transient overexpression 한 sample로 IP-MASS 를 진행하니
degradation form만 detection이 되서 제대로 된 결과를 얻을 수 없었습니다.
--> masspec 은 단백질을 trypsin등으로 digestion한 후 peptide를 분석하는 것인데 degradation form만 detection된다는 것은 무엇을 의마하는것인지 ?
무슨님
293t에 transient overexpression 한 sample로 IP-MASS 를 진행하니
degradation form만 detection이 되서 제대로 된 결과를 얻을 수 없었습니다.
--> masspec 은 단백질을 trypsin등으로 digestion한 후 peptide를 분석하는 것인데 degradation form만 detection된다는 것은 무엇을 의마하는것인지 ?
> e3 ligase 를 transent 하게 overexpression 시켜주니 자체적으로 degradation이
많이 일어났습니다. coomassie staining 을 통해 in gel digestion을 진행을 했지만
overexpression 된 e3 ligase의 degradation된 폼이 너무 많다보니 다른 endogenous한
단백질들이 상대적으로 mass상에서 detection이 되지 않았습니다..
답변 감사합니다.
genyx님께
답변 감사합니다.
TAP 방법도 생각해봤지만 무슨님께 답변 달아드린것처럼
overexpression을 시켰을 때 제 단백질의 degradation 폼이
너무 많아 mass 분석시 target 단백질들의 동정이 제대로 이루어지지 않았습니다.
mass 분석은 제가 한 것은 아니고 의뢰를 한것이며, 분석하신 분께서
e3 같은 경우 overexpression 되면 이와같은 경우가 간혹 있다고 하셨습니다.
그래서 endogenous 한 폼으로 IP 를 하고 싶은겁니다.
혹시 endogenous 한 IP 로 mass 분석은 어려울까요?