[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
2019 Bio Top5 인터뷰
스폰서배너광고 안내  배너1
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Omics > Proteomics
조회 2016  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 EPO Western blot 밴드가 이상합니다.
초보석사  |  2013.11.05 00:49
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
첨부파일 파일첨부: EPO.jpg (34 KB)
이미지 첨부파일

recombinant human EPO를 생산해서 배지만 걷어서 western blot을 했습니다.
그런데 밴드가 넓게 퍼져서 나옵니다. 혹시나해서 농도를 낮춰서 해도 같은 현상이구요.
1일째와 3일째 샘플을 걸어봐도 비슷하네요.
어떤 것이 문제인지 고수님들의 의견을 듣고 싶습니다.

#western
답변하기
검색광고 검색광고
[(주)필코리아] NEB(New England Bio labs)한국총판 필코리아에서 주문하세요!
NEB (New England Bio labs) 한국총판 필코리아입니다. 저렴하고 빠른 배송으로 고객의 연구비와 시간을 절약해드립니다. 전국 어디서나 주문하세요. T:02-2105-7020, F:02-2105-7025, mail: info@philekorea.co.kr
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리안재진  |  2013.11.05   
혹시 구아니딘이 있는 상태가 아닐런지요?
EPO가 박테리아에서는 inclusion body일텐데... 그렇기 때문에 구아니딘으로 녹여 젤을 내린것은 아닌가요? 구아니딘이 있으면 젤이 잘 안내려 갑니다.
초보석사  |  2013.11.05    
아 세포는 CHO cell 에서 생산했습니다.
그래서 따로 녹이는 과정 없이 culture media만 웨스턴블랏으로 확인한 것입니다.
ㅜㅜ
음..  |  2013.11.05    
EPO는 heavily glycosylated protein이기 때문에 밴드가 원래 브로드 하게 나오는 게 정상입니다.
그 이유로 PNGase F 처리 하신 후 걸어보면 샤프한 밴드를 보실 수 있습니다.
bluerain97  |  2013.11.11    
EPO는 세개의 N-glycosylation site를 가지고 있고, 각 glycosylation site 마다 말단에 최고 4개의 sialic acid가 붙을 수 있습니다. 이론적으로 최고 12개의 sialic acid가 붙을 수 있겠죠. 하지만 세포에서 생산을 하다보면 1~12개까지 넓은 범위로 sialic acid가 붙은채 생산이 될 수 있고, 각각 size에 큰 차이를 보이기 때문에 gel에서 보시는것 처럼 넓은 범위에서 broad하게 보이는 것입니다.
정확하게 1 band로 확인하고 싶으시면 단백질을 정제해서 분석을 하시거나, IEF를 걸어서 각 isoform band를 분리해서 확인하시는 것이 좀 더 명확합니다.
답변하기
할인행사 광고 검색광고
코람바이오텍 코람바이오텍
[OriGene] IHC Reagents, shRNA, CRISPR, Proteins, Lentivirus.. (4.27까지)
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
Eppendorf New 25mL Conical Tubes : 혁신적인 디자인과 다양하고 편리한 사용 (4.1까지)
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
βeta
4/6  좌우
144,400137,000
77,30073,000
97,50093,000
126,700120,000
67,10064,000
93,50089,000
114,100108,000
69,10066,000
50,50048,000
107,900103,000
36,50035,000
577,200548,000
55,70053,000
105,100100,000
51,10049,000
117,300111,000
254,000241,000
224,300213,000
80,90077,000
50,40048,000
103,80099,000
86,90083,000
93,00088,000
154,700147,000
최근등록   더보기 >
웨스턴 샘플 로딩 시 팁을 얻고 싶습니다.   02.27
농도 계산에 관해서 여쭈어봅니다.   02.27
글리아딘 용해 해보신 분 있으신가요   02.27
3t3-L1 subculture 후 cell shape이 이상해요   02.27
550nm 흡광도 수치가 1 이하 나와야 정상인가요?   02.27
preadipocyte differentiation   02.27
550nm 흡광도 수치가 보통 1 이하로 나와야 정상인가요?   02.27
RNA 및 단백질 추출 관련 질문입니다.   02.27
CE-OOH 실험 관련 질문드립니다.   02.27
혐기미생물 키울 때 락앤락통에 진공구리스 바르는 것 질문입니다   02.27
에스엘에스바이오
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
에펜도르프코리아