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질문 neuron cell로 MTT를 하는데 cell이 죽질 않네요
MTT assay  |  2013.10.28 17:15
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
neuron cell을 다양한 농도로 깔아 NMDA처리 후 MTT assay를 합니다
당연히 cell이 모두 죽을거라 생각하고 실험을 시작하는데..다른 논문들에서 충분히 알려진 cell농도와 약물 농도를 쓰는데(농도 조절도 해봤구요) cell이 거의 반응을 하지 않고 잘 살아 나네요
araC등 glial cell 억제는 해주고 있고요
제가 잘 모르는 critical point가 있는건지..lab에서도 경험이 없어 잘 해결이 안되네요

실험은..
12well에 키운 cell에 bfr+NMDA처리(0,1,3,6hr)--> 24시간후 MTT처리 후 확인합니다
NMDA는 neuro toxic effect를 주기때문에 많은 cell들이 죽을 것으로 예상되는 물질이예요

무엇이 문제일지 해결방법이 있을지..경험있으신 분들의 조언을 기다리겠습니다
#MTT
 
#NMDA
 
#neuron
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리G.P.Ts  |  2013.10.28   
첫째, 사용한 NMDA가 정말 fresh한 것인 지요? 혹은 neuron cell (primary cell? 아니면 세포주?)이 맞는지요? 
둘째, apoptosis혹은 cell cycle을 고려할 때 24시간보다 좀 더 길게 (48, 72시간 식으로) 처리해 보셨는지요?
셋째, NMDA 말고 일반적으로 알려진 apoptosis 유도 물질을 양성 대조군으로 처리해 보셨는지요?
넷째, 세포 모양에 큰 변화는 없었는지요? 혹은 사용한 MTT 시약은 문제 없는 지요?

말씀드린 위 질문들을 한번 체크해 보시길 바랍니다~

좋은 결과 있으시길 바랍니다!
질문자  |  2013.10.28    
답변감사합니다
NMDA처리시간만 조절해보고 뒤에 24시간 처리는 조절해 보지 않았어요
워낙 논문들이 24시간에 보인다 되 있어서요..

primary culture한 hippo와 cortex로 실험하고 있어요
NMDA는 만들어 냉동했다 쓰는데 칼슘반응볼땐 문제 없어서 이 실험에선 어떨지 생각을 못했네요
그리고 nmda가 잘 알려진거라 이걸로 조건잡고 다른걸 실험할 예정이라..^^;;
다시 한번 해봐야겠습니다 감사합니다

다른분들도 의견 더 있으시면 부탁드릴게요
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