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대학원생
(비회원)
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13.10.07 15:44
제가 293FT랑 HEK 293 둘다 키워봤는데
culture 할 때 크게 다르지 않습니다.
전 둘다 동일한 조건에서 키웠습니다.
293FT도 잘 떨어지지 않나요??
PBS washing 한 후에 trypsin 처리 하는게 원래 정석입니다.
293FT가 워낙 잘 떨어지니 그냥 처리 하신 것 같네요.
293 시리즈가 subculture 할 때 비슷비슷해요..
PBS washing 과정은 모든 cell에 적용되는 과정입니다. serum 성분이 T/E를 inhibition 할 수 있기 때문에 원래 PBS로 serum을 다 제거 한뒤 T/E를 처리하는게 맞지만, 293 같이 잘 떨어지는 cell은 PBS washing과정에서 떨어질 수 있기 때문에 저는 따로 wash는 안 해줘요.
저희는 따로 coating된 dish를 쓰지 않구요, 저희 293은 doubling time이 대략 24시간 정도 되더라고요. subculture 빈도는 passage따라서 조금 차이가 날 수 있으니, 실험자분이 경험으로 맞추시면 될 거 같아요.
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레벨5
바보에게바보가
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13.10.08 12:28
[1]
1) 실제로 큰 차이가 없습니다. Gibco꺼 그냥 쓰시면 됩니다.
2) 항생제 넣고 키워본적이 없어서 이건 패스.. 사실 조금만 조심하시면 컬처할때 항생제 굳이 쓸 필요 없습니다.
3) 배지를 만들어서 사용하시나요? 저는 FBS는 필터 따로 안하고 새 배지 뚜껑 열때 그냥 넣고 씁니다.
[2]
1) trypsin 처리할땐 PBS로 와싱 해주는게 정석입니다. serum이 trypsin의 작용을 저해하거든요.
2) 293 시리즈가 잘 떨어지긴 하지만 굳이 코팅까지 할 정도는 아닙니다. 뭐 이거는 취향따라..
3) 293 시리즈는 전반적으로 빨리 자라는 편에 속합니다만 batch마다 다르니 한번 테스트를 해보시는게 좋을것 같네요. 근데 FT랑 비슷할듯요 (FT를 키워본적이 없어서)
결론은 잘 자라는 셀이니 너무 크게 걱정하지 마시고 한번 하던대로 해 보시길..
답변 정말 감사합니다!! 많은 도움이 되고 있습니다.
정리하면,
1) PBS 워싱은 필요하지만 그것이 cell을 심하게 떨어트릴 경우 패스해도 된다.
2) FBS는 heat-inactivation여부와 상관없다.
3) 항생제를 굳이 안써도 된다.
4) 코팅은 대체로 필요없다.
5) cell은 293FT 만큼 잘 자랄수도 있다. (한국세포주은행에서는 2~3일에 한번 배지교환하고 80% 차면 subculturing하라고 하시더라구용 ㅎㅎ)
잘알겠습니당 ㅎㅎ 추가질문 드립니다!!
1) PBS는 autoclave한 것으로 사용하면 되나요?
2) Media의 경우 한국세포주은행에서 알려주신 대로 (MEM powder + 3차 증류수 + HEPES + NaHCo3 => filter한 뒤에 penstrep 과 FBS넣어 사용) 사용할 생각이지만 많은 분들이 서로 다른 조성의 배지를 사용하고 계신 것 같아서 그냥 한번 여쭤 볼게요. 어떤 배지 사서 쓰시나요? 만들어 쓰시나요? 아님 사용하시는 제품 Cat. No. 가 있나요? ㅎㅎ
이상입니다 ㅋㅋ 감사해요!!
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레벨5
바보에게바보가
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13.10.08 16:38
1) PBS는 오토해서 사용하시면 되니다.
2) 웰진의 DMEM high glucose 사용하고 있는데 여태껏 큰 문제는 없었습니다. 근데 293이야 워낙 잘 자라니 기존에 만들어쓰시던거면 그냥 만든 배지를 쓰셔도 크게 무리가 없지 않을까 싶네요.