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조회 3816  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 western 조언부탁드립니다.
western  |  2013.09.15 22:00
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
첨부파일 파일첨부: 제목 없음.png (69 KB)
이미지 첨부파일

western을 통해서 glucocorticoid receptor(GR)의 인산화되는 경향을 보는 실험을 하고있습니다.

phospho form을 보기전에
인산화되기전의 total GR을 western으로 보기위해
control인 beta-actin과 total GR을 western했습니다.

사진에서 나타나는 순서대로 1. control 2. negative control 3. positive control 4. 실험군
이고 2반복 진행했습니다.

2반복째 베타액틴은 일정한 밴드가 나오지 않았지만
1반복에서의 베타액틴은 어느정도 일정한 경향을 띠는데
문제는 positive control에서의 total GR입니다.
예상 결과는 total GR의 경우는 일정한 경향의 밴드가 떠야하는데
positive control의 경우만 너무 약한 밴드가 뜹니다 ㅠㅠ
뭐가 문제인건지 정말모르겟네요..

베타액틴에서 비슷하게 나온걸로봐서 단백질은 일정한 양 로딩한것같은데
왜 total GR이 다르게 나오는 걸까요?ㅜ
어떻게 해야할지 조언부탁드립니다.
#western
 
#beta-actin
 
#band
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리하늘을달려라  |  2013.09.16   

제눈에는 딱히 beta-actin이 일정해 보이지 않습니다.
어쨋든...
3번 lane이 positive control을 쓰셨다고 하셨는데...
Dexamethasone 같은 계열의 약물을 사용하신건가요?
제가 볼때는...
Dex계열의 약물은 GR을 인산화 시켜서 핵으로 이동시킨다고 알고있습니다.
그로인하여 GRE activation을 통해서 target gene들의 transcription을 증가시키는거 아닌가요?

그래서 Dex계열 약물 처리후의 total-GR 의 expression은 큰문제가 안될수도 있습니다.
어쩌면 positive control에 의해 인산화된 GR이 본연의 역할을 다하고
degradation되는게 (ubiquitination같은 pathway) 정상적일수도 있습니다.

https://www.google.co.kr/#newwindow=1&q=glucocorticoid+receptor+and+ubiquitination

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