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western에서 sample과 sample buffer의 온도에 대해.. |
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 연금술샤 | 2013.08.19 12:52 |
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안녕하세요.
western을 하다가 문득 궁금한 게 있어서 질문합니다.
western과정 중 protein assay를 통해 단백질 정량을 하고 sample buffer와 sample을 섞어주고
가열해주는 과정이 있자나요.
단백질을 1차구조로 변성시키기 위한 과정으로 알고 있는데 이 과정 후 가열한 sample을 다시 얼려주고 나서 전기영동을 위해 다시 녹이고 아이스에 꽂아서 하나씩 꺼내 gel에다가 sample을 넣고 전기영동을 합니다. 저희 실험실에서는 그렇게 계속 했는데요.
아이스에 꽂아두는 건 단백질이 변성되지 말라고 꽂아둔다고 합니다.
첨에 sampling을 할때는 단백질 변성되지 말라고 온도에 신경을 쓰는 건 이해가 가는데
가열을 시키고 난 다음에도 온도에 신경쓰면서 아이스에 꽂아두면서 해야 하는지 의문입니다.
제가 생각했을 때는 가열을 일단 했기 때문에 굳이 다시 얼리고 그 후에도 아이스에 꽂아둔 상태로
실험을 진행해야 하는지 의문이 드네요.
그리고 그 전 과정인 protein assay과정에서도 아이스에 안꽂아도 될 것 같은 생각이 드는데
실험실 선배들이 알려줄 때는 protein assay할 때 standard로 쓰이는 albumin standard도 농도별로 희석해서 만든 다음 냉동보관을 하는데 이것역시 단백질이기 때문에 아이스에 넣고 실험을 진행해야 한다고 합니다. 하지만 정작 제품을 살 때의 상태는 실온보관이거든요. 그렇다면 굳이 냉동보관을 할 필요가 있으며 실험중에도 아이스에 꽂아야 하는냐 의문입니다.
아시는 분 답변 부탁드립니다.
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#sample buffer #western |
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