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 전체 > Cell Biology > Cell Culture
조회 5574  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 cell culture에대한 기초적인 질문..
cell culture입문 초보자..  | 2006.01.04 00:00
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
책을 보다가 헷갈리는것이있어요..

1. 60mm dish와 60파이(?) dish 같은 의미인 것인가요?

2. 10XPBS를 만들었는데요 ph가 6.83되었어요
어떻게 해야할찌....
제가 만든 조성은
137mM NaCl
2.7mM KCl
10mM Na2HPO4
2mM KH2PO4
------------------
UP TO 1L(HCl, pH 7.3)
이렇게(HCl로 적정하라는 것으로) 나와있거라면 분명 pH측정전의 얘네들의 pH가 7.3
이상이라는 뜻인데 pbs의 농도가 높은 상태라서 그런것인지...
그래서 일단 pH는 맞추지않고 그냥 상온에 보관은 해 놓았는데요
이 용액을 1X로 희석하게되면 원하는 pH가 나올까요?
혹 그렇다면 1X로 해놓은 상태에서 pH를 맞춘다음
또 다시 autoclave 해야하는 것이죠?
셀 컬쳐에 써야하는것이라면 적정후에 또 멸균해야할것 같은데요(왜냐면 적정시 사용
했던 HCl은 일반적으로 멸균안된것이므로)

3. DMEM loe glucose 배지는 파우더가 아닌 시판되는 미리 만들어져있는
media solution 을 샀는데요
(조성 1g/L Glucose, 4.0mM/L-Gultmamine, 110mg/L Sodium Pyruvate)
media + FBS + 항생제만 사용하면 되는건가요?

기존의 protocol의 DMEM조성에 보면 탄산수소나트륨(NaHCO3)도 들어가는 것은데요
이것은 따로 제가 만들어 넣어하는 것인지요?...

4. trypsin/EDTA(PET용액 만들때 들어가는 것 같은데.. 이게 무엇을 가리키는지..)
이것도 제가 만들고자하는 미디어에 들어가는 것인가요?


저는
media(+탄산수소나트륨) + FBS + 항생제만 넣고 배양하면되는 걸로 알고있는데요..
컬쳐는 제가 처음으로 혼자 하는거라 책을 봐도 의문 나는 점도 많고 그렇네요

많은 분들의 도움을 청합니다.

새해 복 많이 받으세요
#cell culture
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
곰돌이  |  2006.01.04    
1. 질문하신 60mm dish와 60파이 dish는 같은 의미입니다.
2. 제대로 계산해서 넣으신건지 다시 확인하십시오.
molecular cloning 책에 보면 (vol.3 - A1.7) 정확한 그램이 나와있습니다.
그리고 넣으신 D.W가 깨끗한지요.. 그런것두 확인하세요~
뭐든지 기초적인 곳에서 문제가 발생하기 마련입니다.
그리고 10X buffer를 멸균했다고 해도 1X로 만들면 다시 멸균하는 것은 당연하지요.. ^^;
3. 보통은 그런 경우 다른 compound를 처리하지 않는데,
님께서 키우는 cell line이 굳이 그 시약을 필요로 한다면 넣어주셔야 하구요.
당연히 거기에 serum과 항생제를 넣어서 배양액을 만드셔야 합니다.
4. trypsin은 일반적으로 dish에 붙어서 자라는 cell을 계대하거나 동결하려면
dish에서 떼어내어야 하는데 이때 배양액을 제거하고 PBS로 washing한 후
trypsin을 1ml (100mm dish 기준)정도 넣고 37도 인큐베이터에 30sec-1min정도 두면
cell이 dish에서 떨어져 나옵니다.
또한 뭉쳐서 자라는 cell을 single cell로 분리해주기도 합니다.
물론 배지에 넣는 것은 아니구요..
또한 trypsin은 만든 배지내의 serum에 의해서 inactivation 되니까
배지와 섞어서 centrifuge하면 trypsin은 제거됩니다.

그럼 열심히 실험 하세요~

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