실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Extraction/Isolation
protein Extraction 관해서 조언을 구합니다.
레벨1 예비석사생
1. Extraction protein kit add 1 ml to cell (5*10^6)
2. Vortex for 15 min
3. centrifuge for 12,000g, 4℃ 10min
4. supernatant to a new tube
5. add 0.2 ml chloroform
6. shake for 15 second
7. incubate at RT for 3 min
8. centrifuge for 12,00g 4℃ 15min
9. remove aqueous phase
10. add 0.3ml EtOH
11. shake for 15 second
12. incubate at RT for 3 min
13. supernatant to a new tube
14. protein sample 양을 측정하여 일정량의 protein sample 을 새로운 tube에 담고
15. add 0.75ml isopropanol
16. shake for 15 second
17. centrifuge for 16,00g 4℃ 10min
18. add 1ml ice-acetone
19. vortex 1 min
20. centrifuge for 16,00g 4℃ 10min
현재 위와 같은 protocol을 이용하여 protein을 추출할려고 하고 있습니다.
하지만 과정이 너무 많고 그렇기 때문에 시료의 손실도 일어 날것 같아서 질문을 드립니다.
위의 과정 중 제외 하고 할만한 과정이 있을까요?
또한 chloroform 의 경우 RNA나 DNA를 분리하기 위한 과정으로 알고 있습니다만
isopropanol 의 경우 단백질을 침전시키는 역활 같은데 이것은 ice-acetone 으로 바꾸어서
해돌 될련지요?
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