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레벨5
doubleu
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13.05.20 21:51
ChIP assay에 대한 기본적인 이해가 선행되어야 합니다. 주로 Transcriptional (Co)factor와 promoter의 binding을 보고자 많이 쓰는 실험입니다. 일반적으로 ChIP assay는 cell 내에 protein-DNA를 crosslinking 시켜 lysis 후,
1. Ab로 IP한 후, elute한 product 내에 보고자하는 DNA sequence 를 amplify 시킬 수 있는 primer로 PCR을 함으로써, protein-DNA binding을 확인합니다.
2. 이 때 셀 내에 DNA sequence가 실제로 존재하는 지를 확인하기 위해, binding이 일어나거나, 일어나지 않은 것이 제대로 된 실험에 의해 일어난 현상인지, 그리고 이러한 DNA binding의 정량적인 standard (IP의 Input과 같이)로써, whole cell 을 가지고 PCR를 진행하여 이를 보여줘야 합니다. .
1. Ab IP 시 Ab를 안쓰거나, 혹은 IgG를 쓴 것은 Negative control로써, 그리고 STAT-3는 실험군으로써, specific하게 Stat-3 를 통한 binding임을 확인하는 과정입니다.
2.
이 때 셀내에...: 이를 Input이라고 합니다.