cell culture 에 있어서 minor contem(미약하지만 어느정도의 오염)은 대게 존재합니다. 여기서 어떻게 셀들을 건강하게 유지하는가에 cell culture의 경험이 있다 하겠습니다.

오염원이 뭐 여러가지가 있겠지만 이미 보관해 놓은 셀들이 본래부터 오염된상태였을수도 있구요 미디엄의 박테리아 오염이 의심되신다면 셀없이 미디엄만 인큐베이터 몇일 넣어보시고 오염물이 미디엄안에 산재하는지 확인하시면 되겠네요. 그리고 미디엄을 한번에 500 ml정도 쓰시지 않는한 매번 50 ml Falcon tube등에 나누어서 water bath하시면 본래 stock medium의 pH 변화로 인한 미디엄 색변화를 막을수 있겠어요.

자세히 어떤 contam인지 알수가 없어서 여기까지만 적습니다.

그럴 경우 가장 먼저 의심해야 하는 것은 클린벤치 입니다. 클린벤치의 HEPA 필터를 언제 교환했는지 확인하시고 입자 계수기 를 사용해서 얼마나 청정하게 제대로 유지되는지 확인하시길 바랍니다.

알콜로 닦는 것은 필요하기는 하지만 어느정도 깨끗하다고 하면 사실 생각보다는 큰 영향을 미치지 않습니다. 그리고 UV는 사실 켜 놓으나 마나입니다. 일부 사람들은 안 켜놓으면 마치 오염된다고 착각하는데, 가장 쓸데 없는 것이 UV 켜놓는 것입니다. 왜냐하면 UV는 균의 한층만 죽일 수 있고 그 바로 아래층도 죽이지 못합니다. 그러니까 UV는 신뢰하면 안되고 또한 UV는 눈에 보이는 것이 아니라 얼마만큰 나오는지 모릅니다.

분명한 것은 멸균기를 믿을 수 없다면 일단 일회용품으로 다 교환하시고, 그 다음은 일단 오염되면 오염될 때 사용된 배지등은 모두 다 버리거나 재필터 해야 하고, 일단 가능하면 깨끗한 상황으로 만들어 놓은 다음에 하나 하나 검사해 보세요.

사실 유리문을 쿵 하고 부딛치는 것은 굉장히 위험한 행동같습니다. 이런 것 확인하시고 싶다면, 우선 클린벤치 안에 디쉬에 배지 넣고 쿵 쳐보세요.. 그렇게 몇번 한곳을 배양해서 오염되면 심각한 것이죠..

그리고 클린벤치는 사용하기 전에 반드시 30분간 켜놓는 것이 원칙입니다. 일부 회사는 아침에 켜놓으면 집에 갈때까지 아예 끄지를 못하게 해요. 보통 5분이면 된다고 하지만 제 생각엔 15분은 켜놓아야 하고.. 그리고 클린벤치 안에서는 동작이 빠르면 lamina flow가 깨지기 때문에 위험하니까, 동작은 좀 느린 게 좋습니다.

그리고 원칙적으로는 클린 벤치 내에서는 알콜램프는 사용하지 않아야 lamina flow가 유지되어서 제대로 작용합니다만, 일부 사람들은 알콜램프를 사용하는데 만약 사용할 경우 시간을 최소화해야 합니다.

컨탬이 어떤종류가 되는지부터 알아보는것도 도움이 될 것같네요
예전에 맨날 yeast 컨탬시키던 사람이 알고봤더니 집에서 빵만드는게 취미였다는..
컨탬 종류가 mycoplasma, virus, yeast, ecoli등이 있어요 어떤게 원인인지 아는것도 도움이 될 것같아요..
Peace! 

선생님 답변을 드릴까 합니다.
윗분들 말씀처럼 가장 기본적인 것도 중요합니다. 또한 알콜로 소독하셔도 전체적인 Contam을
줄이기에는 한계가 있으므로 전문시약을 사용하시는 것도 중요합니다.
저희는 Biological industries社 Mycoplasma 예방(Virus,Yeast...), 검출, 치료제를 판매하고 있습니다.
제품은 다음과 같습니다.
1.Phamacidal(1L):Spray형식이며, Co2 incubator, clean bench에 알콜처럼 뿌려주시면 됩니다. 닦지마시구요, Cell이 있는 dish나 plate 걷어내지 않으셔도 전혀 문제 없습니다. 1년정도 사용할 수 있는 양이며 가격은 14만원입니다.
2.Aquaguard-1: 100ml로 10ml정도씩 Co2 incubator內 습도를 맞추기 위한 dish에 풀어서 넣어주시면 contam예방이 됩니다. 가격은 14,000원입니다.
3.Aquaguard-2: 50ml로 마찬가지로 water bath에 10ml?정도씩 풀어서 사용하시면 예방이 됩니다. 가격은 22,000원입니다.
그리고 Mycoplasma test kit도 판매하고 있구요
Contam걸린 Cell 들을 치료하는 BioMYC-1,2,3제품도 판매하고 있습니다.
도움이 되었으면 합니다.
www.insungscience.com
031-296-0116 

Happycell이란 제품 사용을 적극 추천해드립니다. 물또는 알콜과 희석해서 사용(고농축)
다용도로 실험실에서 사용할 수 있습니다. 거의 대부분의 균 및 마이코플라즈마까지 제거.
CO2 인큐베이터 및 Water bath에 오염유무 판단(indicator제공 : 색깔로판단)
사용은 아주 간단합니다. 인체 무해 및 셀에도 전혀 영향을 끼치지 않습니다.

국내회사에서 제조한 제품입니다. 가격도 외산에 비해서 저렴합니다 Delivery빠르며, 샘플 필요하시면 언제든지 공급해여. T : 02-741-7953

glove를 쌔거로 항상 사용하시나요?

cell culture시에 가장 중요시되는건 glove를 새것을 사용하는것입니다.

미디어 안에 Antibiotic 을 1% 넣으신건 맞으시죠?

미디어의 색변화는 ph변화때문이지,contam의 의심요소는 아닙니다.

glove를 쌔거로 항상 사용하시나요?

cell culture시에 가장 중요시되는건 glove를 새것을 사용하는것입니다.

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