저는 이번에 surface biotinylation assay를 이용해 cell 표면의 특정 protein양이 감소 또는 증가하는 것을 보려하고 있습니다. 그런데 avidin-conjugated bead로부터 elution된 protein이 gel에 동량이 loading되었다는 것을 보여주려 하는데 surface protein의 internal loading control로 무엇을 써야 할지 모르겠습니다.
Total lysate에 대한 loading control로 beta actin, GAPDH, tubulin 등을 사용하는 것처럼 cell surface에서도 일정하게 발현되는 protein이 있으면 좋은 control이 될 것 같은데 아직까지도 못 찾고 있습니다.
surface biotinylation assay를 사용했던 paper들에서 보면 예를 들어 tubulin에 대해 western blot을 했을 때 total에서는 band가 detection되고 surface에서는 band가 나타나지 않는 것으로 surface protein만 biotinylation되었다는 것을 증명하고는 있지만 동량의 surface protein이 loading되었다는 것은 보여주고 있지 않더라구요. 그만큼 surface biotinylation assay가 정확한 실험이라 사람들이 control을 사용하지 않는 걸까요? 아니면 제가 아직 못 찾은 걸까요.