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측정은 가능하지만 별도의 cDNA 정제 과정이 필요합니다. 합성된 cDNA 용액 안에 total RNA, dNTP, primer도 들어 있기 때문에 그 상태에서 OD값을 재면 수치가 상당히 높게 나올겁니다.
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cDNA
(비회원)
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13.04.18 15:08
그렇군요~그럼 혹시
정제과정은 어떻게 되는지 알려주실 수 있으신가요?ㅠ
우선은 RNase를 첨가하여 잔류하고 있는 RNA를 모두 제거한 후,
1. phenol/chloroform extraction/Ethanol precipitation을 한 후 다시 녹여 spectrophotomter로 전체 nucleic acid의 양을 정량하는 방법,
2. 키트로 구매할 수 있는 PCR purification kit를 이용해 cDNA를 정제한 후 정량하는 방법
3. 고전적으로는, isotope을 이용해 input 방사선량대비 (Ci/mol) TCA precipitable DNA에서 나오는 방사선량을 계산해 최종 농도로 환산하는 방법
4. 간단하게는 RNA처리후 EtBr coated agar plate에서 나오는 형광을 DNA 농도 standard별로 비교하여 비교정량하는 방법 등 다양합니다.