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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 western blot시 main band 외 잡band에 관한 질문
parkpark  | 2013.04.17 19:31
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)

western blot 하였을 경우,
antibody들 보면 정해진 사이즈가 있는데
그 사이즈 외에 나오는 band들은 무엇을 의미하는건지??
제가 보고자 하는 protein 사이즈에는 경향이 나오지 않았는데
다른 사이즈에 원하는 경향이 나왔는데....
antibody datasheet에도 사이즈는 한가지만 나와있을 경우에 다들 어떻게 해석하시는지?? 

#western blot
 
#antibody
 
#protein
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리carpe diem  |  2013.04.17   

결과를 직접 봐야 알겠지만
non-specific band가 많다면 블로킹이 완벽하게 안 되었을수도 있고

단백질이 클리비지가 일어난부분 중 안티바디가 인식하는 에피톺이 있어서
나올 수도 있죠
어떤 샘플인지는 모르겠지만
셀을 깨서 샘플준비를 한다면 버퍼에 protease inhibitor cocktail이나
protease inhibitor들을 첨가해서 실험하기도 합니다.

parkpark  |  2013.04.17    

blocking 도 1시간정도 했고

1차 antibody도 5% blocking solution에 만들어 붙였어요

cell 역시 RIPA buffer에 protease inhibitor 다 넣었어요 ㅜㅜ

지저분하게 밴드가 많은건 아닌데,, 메인 밴드 외 2개 정도 더 나왔는데

위에 사이즈에 경향이 맞아서 다른 경우가 있나... 싶어서요

개구리바보에게바보가  |  2013.04.17   
protein size marker는 생각보다 정확하진 않습니다.. 그래서 저는 antibody를 사면 일단 knockdown 등을 통해 어떤 band가 실제 보고자 하는 band인지를 확인합니다.
연구원  |  2013.04.19    
보통 non-specific band는 그 lane에 antibody가 붙는 단백질이 있을 때 생깁니다.
그 lane에 antibody가 붙는 단백질이 없으면  non-specific band가 많이 생기지 않죠..
한가지 팁을 드리자면 marker 보는것이 문제가 되는 상황이라면 prestained marker를 사용해서 membrane으로 transfer를 하시면 마커 색상이 그대로 옮겨 집니다.
나머지 과정은 똑같이 하시고 사진을 찍으실때 luminescence를 찍으시고,
membrane을 건들지 마시고 바로 환한 상태로 찍으시면 prestained maker사진을 얻을 수 있습니다.
같은 위치 같은 사이즈의 사진이기 때문에 이 두장의 사진을 합치시면 western marker를 사용하지 않으시고 prestained marker로 사이즈 확인을 할 수 있을 겁니다.
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