실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
japol13님, Luciferase Assay 질문입니다
Luciferase (비회원)
luciferase assay로 고민하고 있는 사람입니다. 여러 글을 읽다보니 japol13님께서 경험이 많으신 것 같아 문의를 드립니다. 저는 세포주에서 PGL3에 target promoter를 연결한 벡터를 트랜스펙트하여 luciferase assay를 하고 있는데, positive control이 잡히지 않아서요.즉 어떤 자극 (시약처리)을 주어도 프로모터 활성이 올라가지 않습니다. 노던, 웨스턴 등에서는 자극을 주었을 때 표적유전자가 발현되는 것을 확인했습니다. 그래서 지적하신 대로 pGL3 control 벡터를 트랜스팩트해서 자극을 주어봤는대도 역시 luciferase 값이 올라가지 않았습니다. beta-Gal assay 값을 보면 적을 때는 2000, 높을 때는 20000 등으로 높아 트랜스팩트 자체는 문제가 없다고 생각하고 있습니다만... 이 경우 무엇을 개선하는 것이 좋을까요? 혹시 메일 주소를 알려주시면 자세히 문의를 드리고 싶습니다. 꼭 좀 부탁드리겠습니다.
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