실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Sequencing
conjugation...도와주세요~
EMBL (비회원)
pK18mobsacB를 가지고 deletion mutant를 만드는 중입니다.. host가 wild type이라 transformation은 불가능하고 conjugation을 사용하는데요.. chromosme으로부터 PCR해서 얻은 target gene을 digestion해서 중간부분의 몇 bp를 deletion하였구요.. sequencing해서 deletion 된 것을 확인했구 pK18mobsacB에 끼워넣구 S17-1에 넣어서 conjugation했는데 selection과정에서 transconjugant를 얻을 수가 없습니다.. 이전에 같은 conjugation 방식으로 (sacB를 사용한 건 아니구요..) insertion mutant를 얻을 때는 확률이 높진 않았지만 그래도 얻을 수 있었는데 지금 몇달째 conjugation을 했는데도 나올 생각을 안 합니다..ㅠㅠ 다른 논문에서 sacB가 selection과정이 아닌데도 mild toxic을 보인다고 하는데 그래서 그럴까요? sacB가 문제가 될지도 모른다고 생각해서 이전에 사용했던 pVIK110을 사용했는데도 안나옵니다.. 혹시 이쪽에 대해서 잘 아시는 분은 조언 좀 해주세요~
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