실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
western blot 밴드가 이상합니다. ㅜ (그리고 western blot시 주의사항도 알려주세요)
western (비회원)
western blot할 때 항상 첫번째 레인은 마커를 걸고 두번째부터 샘플을 로딩하는데
첫번째 샘플(즉 두번째 레인)이 항상 밴드가 약합니다.
1번 그림과 2번 그림은 동일한 멤브레인이고 1번은 제가 알아보고자하는 ab로 잡은 것이고 2번 그림은 tubulin입니다. 정량에는 문제가 없어 보이는데 왜 그럴까요?
ab는 4도에서 O/N했고 비율을 두가지를 써보아도 마찬가지 입니다. (새로 dilution해서 써보기도 했구요) 혹시나 싶어서 첫번째 샘플을 맨 마지막 레인에도 걸어봤는데 마지막 레인에는 멀쩡합니다.
3번째그림 질문은 밴드 모양이 왜 저렇게 나오는지 궁금하네요
실험에 쓰이는 버퍼는 공동으로 쓰는데 다른 사람들은 잘 되는 것으로 봐서 문제는 없어 보이구요 방법에 문제가 있어 보이는데 뭔지 잘 모르겠습니다.
이외에도 혹시 western blot할 때 특별히 주의해야할 사항들도 있으면 알려주세요
실험에서 5% skim milk사용했고 primary ab는 4도 O/N, secondary ab는 실온 1시간 붙였습니다.
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