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질문 in vitro transcription에 대한 질문
올챙이jaebum75  |  2013.02.19 13:40

realtime PCR논문을 보다 질문사항이 있어 올려봅니다.

1.보통 일반PCR과 달리 qPCR은 positive로 사용하는 plasmid를 linearize시켜서 단계희석해서
사용해야 정량PCR이 된다고 합니다. 그 이유를 알고싶습니다. 흡광도등으로 정확한 분자량
계산이 안되기 때문에 하는 것인가요>

2. 제가 본논문에는 plasmid의 단점을 보완하기 위해 host RNA등이 섞여 있는 문제때문에 
  host 및 cell culture에서 추출한 RNAvirus를 positive로 사용하는 대신에 T7 MEGA shortscript
  kit를 사용하여 antisens primer의 5`쪽에 T7 phage polymerase protomor gene을 추가한 primer를 사용하여 PCR을 실시하고 transcription을 실시한 후 gel상에서 cRNA transcript를
확인한 뒤 흡광도를 측정하여 정량하였습니다.
gel확인은 반드시 해야되는 것인가요? product size로 추정하여 확인되는 것인지 궁금합니다.
그리고 transcription할때 사용되는 template는 qPCR에 사용되는 primer로 conventional PCR을 실시하여 얻은 산물을 이용하는 것인지 아니면 cell이나 조직에서 얻은 viral RNA를 이용한 것인지 궁금합니다.

고수님들의 많은 답변바랍니다.

#transcription
 
#RNA
 
#qPCR
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