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 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
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질문 (BCA method) protein degradation이 일어나도 total protein 농도에 영향을 미치는 것인가요?
대학원생  | 2013.01.28 16:35
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)

안녕하세요

여러가지 buffer를 사용해서 단백질 추출 효율을 관찰하는 실험을 수행중입니다.

추출 후 BCA 정량을 통해 단백질 정량을 하는데요,

추후 실험은 특정 단백질에 대한 발현 정도를 확인하는 일반적인 실험이 되겠지만

그 전에 궁금한 점이 있어 질문드립니다.

추출 과정에서 protein degradation이 일어나더라도 BCA는 그러한 것까지 모두 포함한 total protein 농도를 측정하는 것이라고 이해하고 있어서요.

제가 이해하고 있는 것이 맞는지, 아니면 정상적인(?) total protein만 검출되는 것인지 궁금합니다.

'정상적인' 이라고 적은 것은 변형되지 않은 정상적인 protein에 대한 것으로 생각하고 적었습니다.^^;

세포 내 특정 protein이 변성되거나 degradation되어도 total protein의 농도에는 영향을 미치지 않는 것일까요?

답변 부탁드립니다.

그럼 모두 좋은 결과 내시길 바랍니다~~

#BCA
 
#protein degradation
 
#total protein
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
엘피스바이오텍  |  2013.01.28    

Protein은 열이나 강산/염기에 노출되지 않는한 추출과정에서 그리 쉽게 깨지지 않습니다 (아주 민감한 몇종을 빼고는). Protease에 민감한 단백질을 정제할 때는 보통 protease inhibitor를 사용하며 또한 얼음위에서 작업을 하므로 이 또한 깨지기 어렵습니다.

BCA의 원리는 단백질의 구성분인 tyrosin, cystein, tryptophan 등에 의해 높은 pH에서 Cu ion을 환원시키고 이를 BCA 용액을 이용해 색반응을 일으켜 정량을 하는 방법입니다. 단백질이 깨져 있더라도 반응에 변화를 큰 주지는 못합니다. 왜 그런지 원리를 잘 생각해 보시면 분명해 질 겁니다.

대학원생  |  2013.01.30    
속시원한 답변 감사합니다!
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