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 전체 > Immunology > ELISA
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질문 TNF-a (ELISA )
ELISA  | 2006.05.22 00:00
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
ELISA를 이용한 TNF-a 실험을 해보신 분들께.. 답변부탁드립니다..
일반적인 ELISA를 할때 큰 문제가 없었는데.. blank값이 올라간다던지 하는..
그런데 이번에 sandwich ELISA 방법인 TNF-a 실험을 할려고하는데..
standard의 데이터의 오차가 무척 심하고.. blank도 높습니다.
standard가 제대로 안나오니 실험을 진행할수가 없는데요..
원래 이러한 실험이 오차가 좀 나는건지..
아니면 제가 실험할때 뭔가 문제가 있었는지.. 조언 부탁드립니다.
(참고로 저는 ELISA set 를 사서 사용하였고.. 프로토콜대로 진행하였습니다.)
#ELISA
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
실험초보자  |  2006.05.22    


저도 작년에 IL-1B ELISA 할때 그런 현상이 있었습니다..
제품은 바이오소스사였는데.. 다른건 괜찮았는데.. 유독 이것만.. 튀어서..
standard도 변동이 심하고.. 위님이 말씀하신데로.. Blank 값이 엄청 튀었죠...ㅜㅜ
프로토콜 확인하고.. 시약 제조년일도 확인하고.. 문제를 찾지 못해..
결국은 complain 하였습니다..
그쪽 대답이.. 제가 프로토콜로 제대로 했는지 확인하더라구요.. 보관상태도 확인하고.
오염여부도 확인하고..
문제는 확인과정이 너무 오래걸려(6-8개월?.. 기억이 가물) 제가 힘이 빠져 정확한 원인을 알아보지는 못했지만..
제품의 하자일 경우도 있습니다.
회사쪽에 한번 확인해보세요..
ELISA  |  2006.05.22    
답변 감사해요..이 제품을 받은지 얼마되지 않아서요..
제품의 하자이면 그나마 다행이지만.. 실험과정에 특별한 문제는 없었던걸로 보이는데..
그 문제를 찾아내지 못하면 실험 진행이 여기서 막히게 되서..급한 문제라서요..
개구리ELISA  |  2013.09.12   
Blank 값이 높다는 것은 회사서 만들때 잘못 만든것임.
지나가는 나그네..  |  2016.07.19    
우선 blank 값이 올라 갔다는 건, 실험 전반적으로 background 값이 올라 갔다는 의미입니다. 

만약 Kit 제품을 사용 하였다면, wash 과정의 문제일 경우가 가장 큽니다. ELISA경험이 많이 없는 분들의 경우 ELISA wash를 진행 할 때, 조심 조심 약하게 터는 경우가 많습니다. 하지만 ELISA wash과정은 아주 강하게 털어서 안에 wash 용액이 남지 않게 해주어야 합니다. 
--> 핸드타올을 여러겹을 깔고 아주 강~하게 (손이 아플정도로) 여러번 털어서, 물기가 안나올 때까지 털어 주면 background 값이 내려 갑니다. 

그러나 set 제품을 이용하였다면, 변수가 많이 있습니다. 항원 항체를 제외하고 나머지 모든 버퍼를 직접 제작해서 진행을 하였을 테니 말이죠. 
coating bfr, dilution bfr, blocking bfr, washing bfr등 모두 하나하나가 변수가 될 수 있습니다. 

어떤 분은 set구매하여서 진행을 하다가, 죽어도 실험이 안되다가 판매하는 bfr세트 구매하여 진행하여서 결과를 얻은 분도 있습니다. 
ELISA 실험의 경험이 많이 없다면, kit제품을 구매하여 진행 하는 것이 좀 더 수월 합니다. 

도움이 되었길 바랍니다. 

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