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Southern
(비회원)
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12.12.08 19:01
radio를 쓰시는지 Dig를 쓰시는지 모르겠네요.
당연히 아시겠지만 Molecular marker가 나오게 하려면 Radio의 경우 marker DNA에 붙을 probe도 radio로 labeling을 해 주셔야 하구요. Dig를 쓰신다면 당연히 Molecular marker도 Dig로 labeling을 하셔야 합니다.
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엘피스바이오텍
(비회원)
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12.12.10 17:44
Marker에 아무 처리도 하지 않은 상태에서 probe가 marker를 잡는다면 이는 무조건 non-specific입니다. DNA marker에 labeling을 하거나 또는 probe에 marker DNA와 상동성이 있는 서열을 가지고 있어야만 marker가 보입니다.
이는 southern의 문제만이 아니고 western에서 항체가 아무 단백질이나 잡아 marker까지 보이는 것이 100% non-specific한 것과 같습니다.
두분 다 답변 너무 감사드립니다.
저는 Dig으로 하고 있습니다만 같이 실험하는 동료들도 역시 Dig으로 하는데 특별히 marker에 다른 처리를 하지 않음에도 detection 하는데 별 문제가 없다고 합니다. 그냥 loading 한 자체로도 membrane에 잘 나온다는데 저만 유독 marker만 안나오니까 뭘 실수하고 있나 하는 생각밖에 안나오네요. 능숙하게 하는 동료와 하나부터 다 체크를 했는데 별 문제는 없다고 확인은 받았습니다. template까지 다 안나오는거면 실수라고 생각하겠는데 marker만 안나오니 모르겠습니다...
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엘피스바이오텍
(비회원)
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12.12.11 16:57
Marker에 다른 처리를 하지 않아도 band로 나타난다????????
Marker에 사용하는 DNA는 임의의 서열들입니다. 이를 probe가 잡아냈다면 뭔가 심각한 문제가 있는 것입니다. Sample에서 잡은 band가 non-specific하다라는 말 밖에는 되질 않습니다.
임의의 서열을 다 잡는 probe로 또는 실험방법으로 얻은 결과가 진짜일까요????????
band로 나타나게끔 처리하지 않은 marker는 결코 band로 나오지 말아야 합니다.
합리적으로 잘 생각해 보세요! 누구의 결과가 진짜인지!