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 전체 > Molecular Biology-Protein > Pull-down Assays
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질문 세가지 단백질의 interaction을 보는 방법?
ley  | 2012.10.08 10:28
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
Cell에 3가지 단백질을 transfection해서 interaction이 어떻게 되는지 볼 수 있을까요?

지금 하려고자 하는것은 A와 B가 interaction하는데 C가 들어오면서 A나 B에 붙어서 A-B interaction이 사라질 수 있다는 가설 하에 실험을 진행하려고 합니다.

세포내에 3가지를 co-transfection해서 immunoprecipitation을 한 경우는 잘 없더라고요.
참고로, 박테리아에서는 발현이 잘 안되서 pull down assay가 좀 어려운 상황입니다.

경험 있으시거나 괜찮은 조언 있으신분 댓글 부탁드려요^^
#protein
 
#interaction
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
나그네  |  2012.10.08    
선생님 보통은 interaction을 보실려면 western, ELISA방식을 사용하십니다.
하지만 최근엔 SPR(surface plasmon resornance)방식으로 보고 있습니다.
골드칩에 원하는 물질을 붙인 후 Buffer을 흐르게 합니다. 여기에 자기가 원하는 Cell, protein, DNA등을 흘려주어 affinity를 보실 수 있습니다. 저흰 저렴한 비용으로 SPR서비스도 시행 해드리고 있습니다.
궁금하시면  www.insungscience.com 에 문의 남겨주세요 감사합니다.
개구리G.P.Ts  |  2012.10.08   
저라면, A, B, C 중 endogenous하게 발현이 많이 되는 세포주를 선별한 후,
나머지 다른 두 단백질에 꼬리표 (tag; 예 HA, His)를 붙여서 본 세포주에 과발현시켜서 immunoprecipitation을 보겠네요.

경험상 IP가 쉽지는 않아요, 단백질마다 조건도 다르고요,
관련 문헌을 잘 찾아보시고, 가능하다면 문헌 저자에게 문의도 해 보시구요.
누똥  |  2012.10.10    
저라면 각 단백질에 GFP, CFP, YFP tag을 해서 FRET을 보겠습니다.
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