실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
Western sampling에서 시간별로 heating 한다면..
잘 몰라서.. (비회원)
웨스턴 샘플 만들때, 2X sample dye 넣고, 보통 4~5분 정도 끓여주는것이 일반적인데, no heat, 그리고 1분, 2분, 3분, 4분, 5분 이렇게 heating후 확인해볼까 합니다만..이게 올바른 실험일까요?
이 샘플은 일반적인 cell extract가 아니고, purified된 single protein입니다. 그리고 his tag이 N-term 또는 C-term에 각각 tagging된 것이고요. 실험 목적은 이 protein 의 N-term이 매우 stable해서 다른 부위에 비해 denaturation되는 경향이 떨어진다는 것을 보여주기 위해서인데, western에서 N-term와 C-term his tagging protein을 anti-his 로 볼 경우 과연 차이를 볼수 있을까요? 또한 이런 비슷한 방법으로 실제 해보신 분이나, 논문에서 보신 분이 있으시면 좀 알려주세요...
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