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질문 4M NacL buffer pH6 조성에 어울리는 affinity cloumn
알초짜  | 2007.02.07 01:10
제 단백질은 높은 염농도에서 안정화 되기때문에 이상태에서 purify 해야하는데
Ni-nta,ida, cobalt cuffer 여러종류의 metal을 써보았지만 잘 분리되지 않습니다
혹 이런 높은 염에서 분리될수 있는 affinity resin이 있는지 또는 GST tag이 이런농도(4M NaCL)에서 안정화가 될런지 마지막으로 세번째 질문은 제가 연구하는 분야가 키모탁시스인데 serine binding domain이 포함되어 있습니다 serine이 바인딩 하는지 알고 싶은데 동위원소가 레이블되지 않은 serine을 사용하여 바인딩 되는지 않되는지 알수 있는 방법이 있을까요... 일년을 허비하고 있으나 별다른 방법을 찾지 못했군요
도와주세요 ..
#high salt
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리엘피스  |  2007.02.07   
4M NaCl 농도의 buffer조건이라면 affinity 정제는 어렵지 않을까 생각됩니다만, 단백질이 4M NaCl에서 안정화되어 있다면 salt out으로 clude purify를 한 후 gel filtration을 해서 정제하시는 것은 어떨지요?

Serin을 agarose bead에 conjugation한 후 serine-agarose binding된 protein이 존재하는지 알아보는 것도 한 방법일 수 있지 않을까요? 가장 간편한 방법은 동위원소를 사용하는 것이라 보여지지만 여의치 않다면 serine에 형광이나 또는 hapten이 labeling된 것을 찾아보시는 것도 좋을 듯합니다.
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