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레벨5
sein und zeit
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12.09.11 10:46
전기영동한 단백질들을 gel로부터 membrane으로 transfer한 후, 옮긴 부위 이외 영역을 skim milk나 BSA 단백질로 마스킹(masking)하는 것입니다. 이것을 blocking이라 하며, membrane에 흡착 또는 정전기적으로 단백질이 결합하는 것입니다.
이러한 blocking의 이유는 항체도 단백질이기 때문에 masking이 되어 있지 않은 부위에 비 특이적으로 결합할 수 있기 때문입니다. Blocking을 하면 항체가 membrane과 무작위로 결합하는 것이 아니라 항원 단백질만을 찾아 특이적으로 결합하게 됩니다.
그럼 masking에 사용하는 bsa같은 물질이 transfer된 단백질하고는 반응을 안하고 membrane하고만 반응을 해서 antibody와 결합시키고자 하는 단백질을 제외한 membrane부분에만 blocking을 한다는 말씀??
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레벨5
sein und zeit
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12.09.11 16:49
BSA나 skim milk에 포함된 많은 단백질들이 gel로부터 얇은 막위로 옮겨진 단백질과 100% 반응하지 않는다고 장담할 수는 없지만, 그렇게(반응하지 않는다고) 가정하고 다음 과정을 진행하는 것이지요.