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질문 Blocking에서 구체적인 원리..
앞다리연금술샤  | 2012.09.11 10:22

western에서요

Non-specific protein binding을 막아주기 위해서 blocking 을 하자나요

membrane이 단백질인 항체와 반응하는 걸 막기 위해서 하는데
무식한 초보인 제가 생각했을때는 그냥 다 blocking을 하면 반응을 해야하는 단백질하고도
blocking이 될 것 같은데 반응해야 하는 단백질을 제외한 주변만 blocking을 하는 원리가 궁금합니다.



#blocking
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리sein und zeit  |  2012.09.11   

전기영동한 단백질들을 gel로부터 membrane으로 transfer한 후, 옮긴 부위 이외 영역을 skim milk나 BSA 단백질로 마스킹(masking)하는 것입니다. 이것을 blocking이라 하며, membrane에 흡착 또는 정전기적으로 단백질이 결합하는 것입니다. 
이러한 blocking의 이유는 항체도 단백질이기 때문에 masking이 되어 있지 않은 부위에 비 특이적으로 결합할 수 있기 때문입니다. Blocking을 하면 항체가 membrane과 무작위로 결합하는 것이 아니라 항원 단백질만을 찾아 특이적으로 결합하게 됩니다.

앞다리연금술샤  |  2012.09.11   
그럼 masking에 사용하는 bsa같은 물질이 transfer된 단백질하고는 반응을 안하고 membrane하고만 반응을 해서 antibody와 결합시키고자 하는 단백질을 제외한 membrane부분에만 blocking을 한다는 말씀??
개구리sein und zeit  |  2012.09.11   
BSA나 skim milk에 포함된 많은 단백질들이 gel로부터 얇은 막위로 옮겨진 단백질과 100% 반응하지 않는다고 장담할 수는 없지만, 그렇게(반응하지 않는다고) 가정하고 다음 과정을 진행하는 것이지요.
앞다리연금술샤  |  2012.09.11   

ㄳㄳ

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