실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
IP가 되질않아 고생하고 있습니다.
IP초보자 (비회원)
세포주는 293T cell을 사용하였습니다. 1차적으로 protein A에 Lab vision사의 HA(Hemagglutinin)-Ab-1 항체로 IP하여 Santacruz사의 RXRa(198-462 : sc-4089)항체로 western을 실시하였습니다. 이렇게 하면 이론대로라면 HA를 가진 것들이 protein A 비드에 걸러지고 HA를 가진것들중에 RXRa와 상호작용한 것들은 western으로 밴드가 확인되어야지 되는데.. 확인이 되어지질 않습니다. HA와 2차 항제로 사용하는 HRP의 경우는 Rabbit이고 RXRa는 확실히 언급이 되어져 있질않습니다. Host의 문제로 이렇게 될수도 있나요??? 또 한가지는 제가 여러번 실험을 한 결과 각 항체를 사용해 western을 하면 밴드가 확인되는 것을 알았습니다. 그렇다면 protein A가 잘못 되었을 수도 있다는 것인지.. 알고싶습니다. 실은 처음 실험을 시작할때에 protein A와 G중에서 많이 고민을 하고 알아보고 논문을 읽어 모든걸 종합해서 protein A를 선택했었는데.. 또한 제가 추천 받은 것중에 One-step IP western kit라고 Genscript의 제품이 있는데요.. (http://www.genscript.com/cgi-bin/promotion/prom.cgi?pcode=G050173&code=L00231) 이제품을 사용해 보신 분이 있다면 저에게 도움을 주셨으면 해요.. 전화상으로나 이메일을 통해서 여러가지 조언을 얻고 싶습니다. 답변 주시면 제가 바로 연락드리겠습니다.
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