freezing container의 isoprophanol은 확인하셨는지요?
그리고 스탁후 thawing 은 언제쯤하셨어요??
혹시나 질소의 액체부분이 아닌 가스만있는 윗쪽에 넣으신건 아닌지요?
혹시 컨탐된건 아닌가요?
1. DMSO5% ==> 7.5~10% 를 사용하시는 것은 어떤지?
DMSO는 동결과정에서 세포내 얼음결정에 의한 세포손상을 막아줍니다.
너무 낮은 DMSO 농도는 좋지 않습니다.
저는 7.5-10%를 사용합니다.
FBS 농도가 높을 필요는 별로 없더군요. 10% 포함된 배양액이면 충분합니다.
2. 최대한 차갑게 유지: 이 내용을 잘 모르겠군요. 아는대로 설명하지요.
적절한 냉각속도는 분당 1도씨 정도입니다.
- 냉각용기가 없을때: 솜으로 싸거나 작은 스티로폼 박스에 넣어 -20도 냉동실에 넣고 두시간 후 -80도(-70도)로 옮긴 후 하루뒤 액체질소로 옮김
- 냉각용기가 있을때: 윗 분이 말씀하신 것 처럼 이소프로필알콜을 눈금까지 채워져있는지 확인 후 바이알을 넣고 -80도 냉동실로 넣음. 하루 뒤 액체질소로 옮김
3. 세포를 녹일때: DMSO가 저온에서 세포를 보호하긴 하지만 좋은 물질은 아닙니다.
최대한 빠르게 녹여야 하는데, 37도씨 물에 넣고 흔들어주면서 녹이면 1-2분 지나면 얼음이 움직입니다. 이걸 옮겨서 따뜻한 배양액에 넣고 원심분리해줌.
DMSO의 어는점이 영상18도 인데 이걸 제거하기 위해선 따뜻한 배양액이 좋고, 원심분리후 따뜻한 배양액을 한번 더 넣고 suspension만든 후 원심분리를 해주면, DMSO를 한번 만 제거한 것보다 세포가 더 잘 자랍니다.
간단한 실험이 잘 안되면 답답하시겠지만 다시 한 번 시도해 보십시오.
저희 랩에서는 FBS 10% Media에 DMSO 7% 넣어줍니다.
혹, isopropanol box에 vial 넣고 deepfreezer에 하루 보관하신거죠?
윗분들 말씀대로 그냥 바로 deepfreezer에 넣으면 다 죽어요.
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지나가는 자
(비회원)
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12.08.18 01:26
세포에 다가 직접 100 % DMSO를 집에 넣은 건 아닌가요?
DMSO를 cell suspention에 바로 투척?했다면 문제가 생깁니다.
미리 동결용 용액을 만들어놓으시고 사용하세요.
최대한 차갑게 유지.. 이부분에서 급속히 냉각 시키면 데미지가 갑니다
냉각용기가 없다면 솜이나 휴지 등으로 감싸서 온도가 서서히 내려가게끔 해주셔야되구요.
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freezing
(비회원)
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16.06.10 11:18
안녕하세요. 선생님 연구원분들중에 세포배양 하시는분들 많을겁니다. 세포배양 후 세포를 보관할때 보통은 FBS.DMSO.MEDIA를 혼합해서 보관하시는데요. 가장 기본적인 방법이지만 가장 번거롭고 cell viability가 시간이 지날수록 안좋아지게 됩니다. 이를 해결하는 방법이 cell freezing media를 쓰시면 됩니다. 다만 가격이 너무 비싸서 안 쓰시는데요. 요즘 FBS가격도 비싸져서 메뉴얼방식도 비용이 비싸졌고 저희 제품은 cell freezing media가 저렴합니다.
그 제품이 바로 저희
cell freezing media, CRYO GOLD 저희 cryo gold (cell freezing media)가 좋은 이유.
1. 세포를 기존 방법과 같이 질소탱크 보관 뿐만 아니라 -80도 Deepfreezer에 2년동안 보관 가능 2. 기존 메뉴얼 방식대비 소모비용이 동일하거나 저렴(1vial당 2000원미만 꼴) 어떠한 보조제도 필요없이 CRYO GOLD면 준비 끝.
3. 무혈청 동결보존액으로 혈청안의 단백질 성분으로 인한 세포오염없음
4. CRYO GOLD사용 시 며칠이 지나도 민감한 STEM CELL도 Cell Viabilty가 95%이상 유지
5. 조직동결보존도 가능( THERMO GOLD는 세포.조직 냉장보존액) 5. 미국 NIH, 세포조직은행, 국내 외 관공서 기업체등이 사용
이상입니다. 한번 써보세요~ㅎㅎ
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