실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
pGL3- basic vector ligation 해보신 분..급 질문...
ligation (비회원)
혹시 pGL3- basic vector ligation 해보신분 계시나요?.. 예전에 1.8kb짜리를 enzyme site kpn i/Nhe로 했을 경우에..한번에 성공했었는데요... 2.3kb 짜리를 xho I/hind III로 짤랐을 경우에는 지금 거의 일년째 ligation이 안돼고 있네요,.. 물론 vector는 원컷하고 ethanol하고 다시 원컷해서 gel extraction 했구요.... 도대체 일년동안 해볼수있는건 다해봤는데요..왜 안돼는지.. 일단 vector가 의심이 돼기는한데.. 예전에 promega에서 온 vector가 사이즈가 맞지 않아서 다시 새로 받아서 enzyme으로 처리해서 사이즈를 확인하고 사용햇는데요... 계속 1년째 안돼니 머가 문제인지 의심이 돼네요... 혹시 vector에 enzyme 처리시에 충분한 양으로 overnight를 한게 문제인가요? 예전에 성공했을 경우에는 overnight을 하돼 필요양 보다 약간 적은양으로 했거든요.. 다른건 그거 하나뿐인데..혹시 이게 문제인가요?... T vector에 하면 잘돼는데..왜 이 vector에만 하면 안돼는지.. 이제 거의 실험 의욕 상실에..너무 힘이 드네요.. 아시는분 조언좀 해주세요..
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