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 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
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질문 Hig tag purification 에서요
my-biz  | 2012.05.18 21:58
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)

his tag column을 사용하려고 합니다
그런데
NI-nta 가 있고 ni-ida 가 있는데 이는 무슨 차이를 보이는 건가요 ?

참 초보적인 질문이라 민망하지만 ㅜㅜ 부탁드립니다ㅜㅜ

#his tag
 
#protein
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
꽃개구리TX  |  2012.05.19   

http://www.qiagen.com/literature/qiagennews/0497/974ninta.pdf

특히 "Why Ni-NTA resins are preferable" 부분을 읽어보세요...

엘피스바이오텍  |  2012.05.19    

NTA와 IDA의 근본적인 차이는 acetyl기가 3개냐 2개냐입니다.
Ni ion와 결합하는 acetyl기는 2개보다는 3개가 더 안정적입니다.

따라서 hard한 조건의 wash에서도 NTA가 IDA보다는 안정적이며 높은 purity를 보장한다고 하는 것입니다. 또한 Ni ion은 reduced조건 즉 DTT나 b-mercaptoethanol조건에서 변성이 되지 않는 장점을 가지고 있습니다.

단점으로는 독점적인 점 때문에 가격이 비싸다는 것이며, 실제로 다양한 단백질에서 두개를 비교해 보면 광고에서 말하는 것과 같은 차이가 거의 없다는 것입니다. 오로지 한가지 주목할 장점은 reduced 조건에서 resin이 변하지 않는 다는 것인데, 실제로 lysis/binding조건에서 DTT를 첨가하는 경우는 거의 없으며 DTT를 첨가할 필요가 있느냐 하는 것입니다.

His정제에서 purity와 yield는 발현양과 bind/wash/elution조건을 어찌 최적화하느냐에 따라 결정되는 사항입니다.   

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