실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
ligation시 vector랑 insert농도 측정 및 계산법~~~
ligation (비회원)
ligation시 vector랑 insert농도를 3:1비로 하잖아요.. 모 P회사 protocol에서 권장하는 비율인데요.. 계산방식이 vector 농도X insert size/vector size X3/1이더라구요.. 그럼 여기서 제가 이해하고있는게 맞는지 몰라서요.. 1.vector 및 insert 농도는 언제 측정한것을 말하나요? enzyme 처리 및 etanol prepitiation 다해서ligation직전에 spectrophotometer로 측정해서 계산해주며 되나요? 2. 그럼 spectrophotometer으로 잰 값이 예를 들어서 260흡광도에서 vector의 경우 0.1이다.vector size 4.8kb 그럼 0.1X50=5마이크로 그람이고 이걸 1/100로 dilution해서 사용할 계획이면 계산상 500ng이 됩니다. insert의 경우 260흡광도에서 vector의 경우 0.01이다.insert size 1.8kb 그럼 0.01X50=0.5마이크로그람이 됩니다. 그러면 위에 protocol계산식에 의하면. 500ng*1.8kb/4.8kb*3/1=562ng만큼의 insert를 넣어주면 되나요? 제가 석사생이라 제가 올바로 이해한건지 ...몰라서요.. 제가 위에 권장비율인 3:1로 했는데ligation 잘안되서요. 제가 잘못이해하고 계산했나싶어서요.. 아님 ligation하기 좋은 비율이 있나요? 고수님들 도움주세요
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