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질문 Fatty acid와 BSA의 conjugation
실험초보  | 2012.04.23 16:31
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)

Fatty acid stock을 만들어 실험에 사용하고자 합니다.
실험 초보인지라 어려움이 많습니다.
논문마다 워낙 다양한 실험 방법들이 나와있던데
자세한 과정이 기록되어있지 않아 매번 실패를 거듭하고 있습니다....
F.A와 BSA를 conjugation 시키는 방법이 가장 합리적인 것 같아 시도해보고 있는데,
(F.A.를 유기용매에 녹여 보는 방법도 시도해보았으나 toxicity가 클 뿐 아니라
solution은 잘 만들어지나 media에 처리시 침전과 더불어 F.A가 둥둥 뜨더군요.)
서너 케이스 모두 심각한 precipitation으로 인해 실험에 사용하기 어렵습니다.
- (FA+ethanol)+(H2O+BSA)
- (FA+ethanol)+(NaOH+BSA)
- (FA+NaCl)+(BSA+NaCl) 등
온도를 조절하고 시도했을 때가 그나마 나았던 것 같아 다시 시도해보고 있긴 합니다만
공개해주실 수 있는 최대한 detail한 과정이 있다면 도움 받고 싶습니다.
더불어, filtration을 진행하는 경우도 있던데 그 과정은 실린지 필터로 하는건가요....

#palmitate
 
#BSA
 
#conjugation
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
FA-BSA  |  2012.04.23    

Fatty acid는 BSA와 complex를 만들어 놓는 것이 좋습니다.
전에 사용한 방법을 알려드리자면,
지방산 (40 umoles)에 0.8 mL 95% ethanol을 첨가하여 vortex하고, 1.6 mL 100mM NaOH (in 95% ethanol)를 첨가한 후, 질소가스로 건조시킴니다.
물론 clean bench안에서, 0.2 um air filter를 통과한 질소가스를 사용하구요.
여기에 sterile한 1 mL H2O (55~65도씨)를 넣어 용해한 후,
37도씨의 따뜻한 9 mL BSA (7.5%, essentially fatty acid free)에 지방산을 조금씩 첨가하여 섞어줍니다.
최종적으로 fatty acid와 BSA가 4 mM : 1 mM가 됩니다.
흠..... 저흰 이렇게 사용했었는데......... 도움이 되었으면 하네요.

알efufly  |  2013.11.21   
FA-BSA
실험초보님께서 하신 질문에 대한 답변 잘 보았습니다.
(실험초보님께도 고맙습니다.)
저도 fatty acid 실험을 이제 막 시작한 연구원입니다.
저 역시 실험 초보님 처럼 treatment 과정에서부터 어려움을 겪고 있었는데요
연구원님께서 해주신 답변에 희망이 보입니다ㅠㅠ
그런데 질문이 하나 있습니다.
연구원님께서 최종적으로 4mM:1mM로 만들어서 사용하신다고 들었는데
제가 사용하고자 하는 농도는 조금 더 높은 농도입니다.
혹시 fatty acid를 더 높은 농도로 녹여서 사용해보신적이 있는지 궁금합니다.
답변 주신다면 정말 정말 감사하겠습니다.ㅠㅠ


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