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 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
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질문 RNA추출시에요~~!!
RNA  |  2005.04.24 00:00
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
안녕하세요..
궁금한게 있어서 이렇게 글을 올립니다..
전 지금 mouse의 liver에서 RNA를 추츨하고 있습니다.
과정을 요약하자면..Trizol으로 조직 lysis -> chloroform -> isopropanol -> 75% EtOH washing 이런식으로 RNA를 뽑고 있어요..
여기서 isopropanol의 역할은 RNA를 균질화시키는 것이죠...
isopropanol을 넣고 incuvation시킨 후에 centrifuse를 하고 나면 pellet이 만들어지잖아요.. 그런데 centri~ 시간인 10분동안에 pellet이 만들어지지 않는 경우가 있습니다..
물론 10분을 돌리면 pellet이 잘 만들어지기도 하지만.. 가끔씩 뭉쳐져만 있고 pellet이 안만들어지는 경우가 있어요.. 왜 그럴까요??
한 5분 정도 centri를 더 하게 되면 pellet이 생겨요..
이건 isopropanol의 양과 관계가 있나요??
다른 샘플보다 aqua phase를 더 많이 딴 것도 아니고 일정한 양만큼 따서 isopropanol의 양도 일정하게 넣는데도 이런 경우가 생긴다면.. 뭐가 문제일까요??
궁금합니다..
아시는 분 리플 부탁 드려요..
모든 분들.. 하고자하는 실험 모두 성공하시길 바라며...
즐거운 하루 되세요^^
#RNA Extraction
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
엘피스  |  2005.04.24    
Liver는 glycogen 때문에 pellet이 일반적으로는 다른 조직들 보다 큰데 좀 이상합니다.
Isopropanol을 넣고 4C나 -20C에 잠깐 두었다가 원심분리를 해보시죠?
근데 Trizol을 쓸때는 salt (Sodium acetate)를 넣어주지 않나요? Trizol을 써본지 워낙 오래돼서 이나마도 가물가물하네요.

Isopropanol은 RNA를 침전시키기 위한 용도입니다. 균질화의 개념은 아니죠 ^^
japol13  |  2005.04.24    
Isopropanol을 넣고 잘 섞지 않았을 가능성이 큽니다.
잘 섞으셨다고 하시면 뭐라 할 말이 없지만
Trizol에서 다른 것이 섞여있다 하더라도 침전이 안되는 경우는 없을 것 같습니다.
어떤 때는 침전이 되는데 어떤 때는 안된다고 하셨는데
그 때문에 더더욱 그럴 것 같습니다.

japol13

..  |  2005.04.24    
펠렛의 정체가 다량의 RNA일 수도 있고, 여러 잡것들이 섞여있는(DNA 등) 것일 수 있잖아요?

펠렛이 보이지 않더라도 제대로만 하셨다면 RNA는 존재할겁니다. PCR 한번 해 보세요.
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