[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
서브원
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
Miami Winter Symposium 2023 – Molecular Neuroscience: Focus on Sensory Disorders 학회 참관기
전체보기 안전점검 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 12153  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 western 5x SDS page loading buffer
buffer  | 2012.03.20 11:23
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
5x SDS page loading buffer를 만들었습니다.

그럼 sample이랑 1:4로 섞어서 100도 에서 5분 끓이고 아이스에 넣어 두었다가
loading 하면 되는거죠?

그러니까 만약에 protein 을 10ug으로 쓴다고 할때 sample A가 5ul 들어간다면 
5x buffer를 1ul 넣어서 끓이고 total 6 을 loading 하면 되는건가요??
 

#sds
 
#sample buffer
 
#sds
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
알풍금  |  2012.03.20   

5 X buffer란 농도가 5배이므로 1/5 희석하여 사용하라는 뜻이지요

tot 6ul 부피로 사용하면 1/6 이 됩니다.

그러니 sample 4ul 에 laoding buffer 1ul 를 넣어야 1/5희석이 되죠

엘피스바이오텍  |  2012.03.20    
4ul sample에 1ul가 맞습니다. SDS-PAGE에서 loading buffer는 Tris의 농도가 중요하기 때문에 DNA loading buffer처럼 대충 넣고 하면 미세한 차이지만 문제가 생길 수 있습니다.

Boiling후 원심분리하여 녹지 않은 물질을 떨어뜨리고 loading해야 합니다. On ice과정은 boiling한 단백질에서는 의미가 없습니다.
Wanderer  |  2012.08.22    

답변이라기엔 질문시와 시일이 많이 자나서 민망하지만, 차후 검색으로 보실 분을 위해 몇자 적습니다.

일단 10ug sample 5ul가 있는데 5X sample buffer얼마를 넣느냐가 질문의 요지라면,

정확히 5X sample buff. 1.25ul만 넣어서 진행하시면 됩니다.

윗분들 처럼 "4ul만 써라"라고 하면 실제 들어가는 단백질의 양은 10ug보다 줄어들겠죠?

그리고 ice cooling이 필요없다는 답변도 있는데, 어떤 의미에서 그런 답변을 하셨는지 궁급합니다.
이 과정은 실험에 큰 영향을 주는 과정은 물론 아닙니다만, 좀 더 정밀한 실험을 위해서는 필요한 step이지요.
더붙여 ice cooling후 반드시 spin down하고 상층액만 사용하셔야 합니다.

늦은 답변에 길어져서 죄송합니다.

좋은 결과 바랄께요^^

답변하기
할인행사/신제품신기술 광고 검색광고
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
최대 800개 유전자 발현량을 동시에 확인할 수 있는 nanoString nCounter SPRINT SAL.. (12.31까지)
인성크로마텍 인성크로마텍
[BQC] 산화 스트레스(Oxidative Stress) 분석 / 세포 분석 / 조직 염색 키트 20% 할인 (4.28까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN 한국공인대리점] TECAN Microplate reader/ IMPLEN Nanophotomet.. (4.11까지)
이츠바이오 이츠바이오
[abm] PCR Products 1+1 및 20% 할인 행사!! (4.28까지)
대일랩서비스 대일랩서비스
Thermo 기초장비 30~20% 할인 이벤트(재고한정) (5.31까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
Spatial Transctiptome 분석 Tumor Microenvironment(TME) 연구의 새로운..
최근등록   더보기 >
SDS-PAGE marker band 위치 문제   03.26
Telomere length 의 통계적 처리   03.25
pLentivirus 을 이용한 target gene insertion 질문드립니다   03.25
외국에서 식물 잎 운반 방법 궁금합니다.   03.25
cell selection할 때, Hygromycin B 항생제가 잘 안드는데 보관 조건을...   03.25
전기영동에서 band가 어떤걸 의미하나요?   03.25
Trypton,pepton   03.24
메탄올 용매 용해 독성   03.24
cloning 실험하는데 dna 몇 최소 ng 있어야 사용가능한가요?   03.24
blue-white screening 실험에서 전기영동을 하는 이유가 뭔가요?   03.24
최근답변자 우수답변자
대왕개구리SPEED

대왕개구리강시

개구리실험조아

알enen

알나는야학부생

알Choip

알친절하게살자

개구리새슬

대왕개구리SPEED

대왕개구리엘피스

꽃개구리visavis

꽃개구리Kozmoj

개구리secu

청개구리SGPG

개구리현직백수

개구리미맹

실험관련연재
세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
엘앤씨바이오 광고