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 전체 > Laboratory Animals > Blood
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질문 Blood에서 RNA 추출 시 lysis.. 도와주세요 ㅠㅠ
merry  | 2012.02.06 16:04
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)

whole blood에서 RNA 추출을 하려고 합니다.
RNA는 50 ng 정도만 필요해서, Blood 50 ul (micro-liter) 를 사용했습니다.
blood 전용 kit 사용하지 않고, Qiagen의 일반 RNA 추출 용 Mini kit를 사용했습니다.

Lysis 할 때 Qiagen kit의 RLT buffer 350 ul 에다가 Blood 50 ul 를 넣고 vortex 했습니다.
충분히 vortex 했다고 생각하고 추출을 진행했는데,
RNA가 거의 나오지 않았네요 ㅠ_ㅠ (50 pg 정도?;;;)
fresh 한 blood 였고, RNA 실험 계속 해 오고 있었는데 blood sample은 처음입니다.

homogenize를 안 해서 lysis가 잘 안 된 것일까요?
RLT buffer 만으로 blood sample lysis가 불가능한가요? ㅠㅠ

#blood
 
#rna
 
#qiagen
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
나그네  |  2012.02.06    
샘플 volume이 부족해서 그런거 아닐까요??? Trizol방식에 Column방식의 제품을
써보시는 건 어떨까요?
Geneall Hybrid-R blood RNA제품을 추천해드립니다. 샘플도 제공하고 있으니깐 검토해보세요
www.geneall.com
입니다.
merry  |  2012.02.07    
ㅠㅠ.. 지금 연구실에서 이 실험만을 위해서 새로 키트를 장만하기는 힘들 것 같아요..
시간적 여유도 없구요..

sample을 좀 더 충분히 넣고(750 ul),
주사기 바늘에 통과시켜서 homogenize 해 보면 좀 더 lysis가 잘 될까요?
RLT buffer가 lysis 효율에 문제는 없나요?

처음 시작했던 sample 양이 적었다고 생각하긴 하는데요,
그래도 fresh 한 sample인데 RNA가 1ng도 안 나오는건 좀 심한 것 같아서요.. ㅠㅠ
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