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target이 435bp 이면 extension을 굳이 2분 동안 하지 않으셔도 될 것 같습니다.
30초만 주어도 충분합니다.
그러면 긴 사이즈의 잡밴드들이 줄어들 것 같습니다.
그리고 약 435bp 밴드가 나오고 있는 것 같은데 그 부분을 확인해보시는게 좋을 것 같습니다.
PCR의 목적이 무엇인지 잘 모르겠는데 elution해서 sequencing 해보시면 될 것 같습니다.
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영어로땡큐
(비회원)
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11.12.28 09:06
primer를 바꿔 보시길 강력히 권해 봅니다.
논문에 나와있는 프라이머라도 문제가 있을수 있습니다...
직접 디자인해서 프라이머 제작해보세요...
경험도 늘고 여러가지 공부가 될수 있습니다...
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레벨1
egomaniac
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11.12.28 11:34
사용하시는 Taq을 HOT Taq으로 바뀌보세요.
답변달아주셔서 감사합니다.
primer도 다른 primer로 사용해서 해봤는데..
그것또한 안나오더군요ㅜㅠㅜㅠㅜㅠㅜㅠㅜㅠㅜ
그래도 몇가지 팁을 얻어서 기분이 좋네요
한번 진행해보도록하겠습니다^^^^^^^^^^^^^
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레벨5
당근시른토끼
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11.12.28 20:11
우와 정말 많이 나왔네요.. 윗분 말씀데로 primer를 새로 제작해야할 것 같습니다. 그리고 현재 쓰는 primer의 길이가 몇 mer인지는 모르겠지만 길이를 좀 늘려야 할 것 같네요. primer의 교체가 정답인 것 같습니다.
만약 primer 를 바꾸는게 여의치 않다면 Tm gradient로 온도 설정을 다시 setting 해보심이 어떨런지...
4355bp니 Taq쓰면 extension time은 30s도 충분합니다.
ladder처럼 나오면 primer 바꾸는게 최고죠. 같은 site면 길이 늘여도 별 소용없습니다.
바꾸는게 안된다면 hot start type 쓰시면 많이 줄죠..