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 전체 > Molecular Biology-DNA > Southern Blot Analysis
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질문 안녕하세요 대학생인데요 ^^:
알하이헬로  |  2011.12.04 16:01

"southern blot으로 DNA의 copy수를 확인하는 방법 "   !! 이렇게 해서

기말고사에 출제 한다고 하는데요 ㅠㅠㅠ 아무리 검색해도 구체적인 내용이라 그런지

나오지가 않아서요 ㅜㅜㅜ 조금만 알려주세요 ~ 아니면 관련자료가 있는 링크라도 ㅠㅠ 
-------------
추가 수정: Q&A팁에보니까 이런류의 질문은 답변을 잘 안해주시는 거 같네요 ㅜㅜ 근데 정말로 아무리 찾아도 안나와서요 힌트라도 주시면 제가 찾겠습니다.!!

#southern blot
 
#copy number
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  2011.12.04   

어떤 DNA인가가 중요합니다.
gDNA는 당연히 cell당 1 copy이니 측정의 의미가 없습니다.
만일 대상 DNA가 plasmid라면 문제는 간단해집니다.
 
gDNA에 copy 수가 정확히 알려진 유전자를 찾습니다.
그 유전자의 염기서열 일부를 PCR로 확보합니다.
plasmid DNA의 염기서열 일부를 PCR로 확보하거나 제한효소 절편을 추출해서 확보합니다.
이때, gDNA 조각과 plasmid 조각의 길이와 (G+C)%는 같게 디자인합니다.
plasmid를 가지고 있는 cell을 lysis해서 전체 DNA를 정제하고 적당한 제한효소로 절단합니다.
자른 DNA를 아가로스 gel에 전기영동해서 membrane에 transfer합니다.
먼저 준비한 두 DNA 조각(두 DNA의 양이 같아야 함)을 표지하고 Southern bloting을 합니다.
gDNA 밴드에서 나온 시그날의 강도와 plasmid 밴드의 시그날 강도를 비교하면 plasmnid의 copy를 계산할 수 있습니다.

개구리당근시른토끼  |  2011.12.05   
책을 조금만 찾아봐도 알 수 있는 내용이기에 그런 것입니다. 질문하신 물음에 자세히 대답할려면 댓글칸으로는 부족할 것 같네요. 기본적인 내용은 너무 internet에만 의존하시 마시고 책을 찾아보는 것도 좋은 방법인 것 같습니다.
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