실험Q&A를 통해 여러분의 지식을 나누어 주세요. 답변을 등록하시려면 로그인 해주세요.
본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
어떤 DNA인가가 중요합니다.
gDNA는 당연히 cell당 1 copy이니 측정의 의미가 없습니다.
만일 대상 DNA가 plasmid라면 문제는 간단해집니다.
gDNA에 copy 수가 정확히 알려진 유전자를 찾습니다.
그 유전자의 염기서열 일부를 PCR로 확보합니다.
plasmid DNA의 염기서열 일부를 PCR로 확보하거나 제한효소 절편을 추출해서 확보합니다.
이때, gDNA 조각과 plasmid 조각의 길이와 (G+C)%는 같게 디자인합니다.
plasmid를 가지고 있는 cell을 lysis해서 전체 DNA를 정제하고 적당한 제한효소로 절단합니다.
자른 DNA를 아가로스 gel에 전기영동해서 membrane에 transfer합니다.
먼저 준비한 두 DNA 조각(두 DNA의 양이 같아야 함)을 표지하고 Southern bloting을 합니다.
gDNA 밴드에서 나온 시그날의 강도와 plasmid 밴드의 시그날 강도를 비교하면 plasmnid의 copy를 계산할 수 있습니다.
-
레벨5
당근시른토끼
-
11.12.05 22:58
책을 조금만 찾아봐도 알 수 있는 내용이기에 그런 것입니다. 질문하신 물음에 자세히 대답할려면 댓글칸으로는 부족할 것 같네요. 기본적인 내용은 너무 internet에만 의존하시 마시고 책을 찾아보는 것도 좋은 방법인 것 같습니다.