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3차 DI water mixing 직후에는 물과 Phenol의 극성이 달라서 뿌옇게 변하는데 몇시간 saturation 후에는 물층과 water saturation phenol 층으로 분리가 됩니다. 보통은 acidic buffer를 포함하여, DNA를 제거하는 Phenol 조합을 많이 사용합니다.