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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 cell supernatant에서 WB하는 법!
알가슴앓이대학원생  | 2011.08.22 15:28


논문을 읽다보니 cell culture 상층액에서 western blot assay를 한 것이 있더라구요.

주로 cell supernatant에서는 분비되는 단백질의 발현을 보고자 할 때

ELISA와 같은 방법을 써서 확인하는데,

어떻게 cell culture 상층액에서 원하는 단백질의 발현을 볼 수 있는 것인가요?

어떠한 원리로 하는지 궁금합니다. 

#western blot assay
 
#cell culture supernatant
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
111  |  2011.08.22    

 세포에 조건별 처리 -> 배양 -> '상층액'만 수거 -> 상층액정제(배지성분제거 등) ->
SDS-PAGE로 전개 -> transfer -> western blot(1차 항체는 보고자하는 단백질에 관련된 항체)

개구리블루아리아  |  2011.08.23   

cell culture 상층액을 가지고 western 을 하려면

우선, serum free media 에서 cell을 키워야 합니다.

과량으로 secretion 된다면 문제가 없지만, 그렇지 않을 경우에는 media 를 centricon 등으로

농축해야하는데 일반적인 serum 첨가 media 에는 다른 단백질이 너무 많아서 같이 농축될경우

western 시에 방해가 되기 때문입니다.

media 를 그냥 걸어서 western 상에서 관찰되지 않으면

농축을 해보고, 그도 안되면 tagging recombinant protein expression 일 경우에

affinity column work 으로 정제/농축하여 확인하는 방법도 있습니다.

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