실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Sequencing
클로닝 결과를 엔자임 컷으로 확인하고 싶은데 도무지 모르겠습니다.ㅠ
레벨1 흑곰
zebrafish로 in situ 실험을 하기위해 프로브를 만들고 있습니다.
probe를 T 벡터에 클로닝해서 in vitro transcription을 하려고 하는데요.
probe cloning result를 시퀀싱했더니 엉뚱한 서열이 클로닝 되어 있었습니다.
시퀀싱된 서열은 407bp이고 probe 서열은 414bp여서 콜로니 pcr을 통해서는 구분이 어려웠습니다. 그래서 제가 원하는 서열이 클로닝된 콜로니를 찾기 위해 플라스미드 프렙해서 엔자임 컷팅을 통해 알아보려합니다. 우선 neb cutter를 통해 제 probe의 엔자임 사이트를 알아보고, 잘못 클로닝된 서열의 엔자임사이트를 알아보았습니다. 비교 후 제 probe에서 300bp정도로 2컷을 하는 엔자임을 선택했는데요, hpy166II 였습니다. 실험실에서 쓰지 않는 엔자임같은데, 이렇게 하는것이 맞는지도 모르겠고, 무튼 제 probe가 제대로 클로닝 됐는지 알고 싶습니다.ㅠㅠ
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